Analisis kualitatif untuk hepatitis C

Share Tweet Pin it

Tinggalkan komentar 7.180

Analisis kualitatif dari reaksi rantai polimerase - PCR untuk hepatitis C menentukan ada atau tidaknya HCV dalam tubuh. Dalam kondisi laboratorium, struktur RNA dipelajari, yang akan mencakup virus. Dalam kasus deteksi virus C, perlu untuk menjalani pengobatan, karena keadaan hati yang terabaikan akan mengakibatkan konsekuensi serius. PCR berkualitas tinggi juga dilakukan setelah pemulihan untuk memastikan tidak adanya antibodi. Ditugaskan untuk pemeriksaan rutin. Dengan konsentrasi agen penyebab yang rendah dalam darah, PCR (kualitatif) mungkin tidak mendeteksi apa pun, karena sistem diagnostik memiliki ambang sensitivitasnya sendiri. Dalam kasus tahap awal penyakit atau bentuk ringan, diagnostik ultra PCR dilakukan pada peralatan ultra-sensitif.

Apa itu virus RNA?

Istilah RNA virus hepatitis C (atau virus hepatitis C) adalah penyakit hati itu sendiri. Virus C berikatan dengan sel tubuh yang sehat dengan menembus ke dalam. Seiring waktu, menyebar ke seluruh tubuh, hanya perlu masuk ke dalam darah. Akibatnya, patogen menembus hati, berfusi dengan sel-selnya dan bekerja keras. Sel-sel hati (hepatocytes) bekerja di bawah pengaruhnya, mengalami perubahan, dan dari sini mereka mati. Semakin lama virus C berada di hati, semakin banyak jumlah sel yang mati. Seiring waktu, kembangkan penyakit berbahaya yang menyebabkan degenerasi dan kematian yang ganas.

Infeksi hati dengan jenis virus ini mungkin tidak memanifestasikan dirinya secara eksternal. Selama bertahun-tahun atau dekade, orang yang terinfeksi merasa benar-benar sehat, dan hanya pemeriksaan acak yang paling sering mengungkapkan patologi. Ketika mendonorkan darah untuk hepatitis, bagian dari rantai RNA (ribonucleic acid), yang merupakan bagian dari gen manusia (DNA), diperiksa. Hasil tes laboratorium tidak boleh digunakan untuk perawatan diri, karena ini hanyalah indikator. Gambaran yang tepat dan diagnosis lebih lanjut lebih baik ditentukan oleh dokter.

Ketika selesai: indikasi untuk penelitian

Dalam konfirmasi HCV, analisis PCR dilakukan (polymerase chain reaction). Studi PCR membantu menemukan bahan patogen dalam struktur RNA dan meresepkan terapi yang efektif. Diangkat dalam kasus-kasus berikut:

  • deteksi tanda-tanda peradangan hati;
  • pemeriksaan penapisan untuk pencegahan;
  • pemeriksaan orang-orang yang berhubungan;
  • diagnosis hepatitis asal campuran (penentuan patogen utama);
  • menentukan tingkat aktivitas reproduksi virus dalam bentuk kronis;
  • sirosis hati;
  • untuk menentukan efektivitas pengobatan yang ditentukan.
Studi PCR diresepkan oleh dokter untuk menentukan efektivitas suatu program pengobatan untuk hepatitis.

Ada analisis kualitatif dan kuantitatif dari PCR. PCR kuantitatif menunjukkan rasio persentase RNA terhadap pembawa virus dalam darah, dan kualitatif menunjukkan adanya atau tidak adanya virus. Indikator positif kualitas (kehadiran RNA Hepatitis C) juga membutuhkan penelitian kuantitatif. Tingkat konsentrasi agen penyebab hepatitis C yang tinggi dikaitkan dengan risiko penularannya, yaitu infeksi orang lain. Jumlah yang rendah lebih bisa diobati. Jumlah virus RNA dalam darah tidak berhubungan dengan intensitas penyakit. Analisis PCR juga dilakukan dalam kasus terapi interferon untuk meresepkan durasi dan kompleksitas pengobatan.

Fitur analisis PCR berkualitas tinggi untuk hepatitis C

Analisis kualitatif dengan indeks reaksi berantai polimerase diberikan kepada semua pasien yang memiliki antibodi terhadap hepatitis C dalam darah mereka.Orang-orang yang telah sakit dan sembuh harus kembali mengambil tes. Disarankan untuk lulus tes untuk hepatitis B, kemudian, dalam kasus kesimpulan positif, dan untuk hepatitis D. Juga, reaksi dianalisis secara kualitatif harus dilakukan bersamaan dengan tes darah lainnya. Analisis akan menunjukkan gambaran lengkap penyebaran virus.

Dari hasil tes, hanya tes positif untuk hepatitis C akan terlihat atau negatif, yaitu ada atau tidaknya virus. Jika output "terdeteksi", maka virus akan terus aktif. Penunjukan "tidak terdeteksi" menunjukkan tidak adanya virus atau jumlah yang kecil. Dengan indikator ini, harus diingat bahwa sensitivitas analitis sistem diagnostik berbeda dan bahwa RNA hepatitis C mungkin masih ada di dalam darah, tetapi tidak dimanifestasikan dalam analisis.

Metode PCR yang sangat sensitif, ultra hepatitis C mengungkapkan bahkan dalam jumlah yang sedikit. Sebuah studi hibridisasi fluoresensi digunakan, yang berkali-kali lebih tinggi dari sistem PCR standar. Metode ini digunakan dalam beberapa kasus:

  • dugaan bentuk-bentuk tersembunyi dari hepatitis C;
  • Diagnostik PCR tidak mengkonfirmasi patogen, tetapi ada antibodi;
  • dalam hal pemulihan;
  • untuk mendeteksi infeksi dini.
Kembali ke daftar isi

Analisis dekode

Dekode HCV PCR mempengaruhi keputusan akhir ketika membuat diagnosis, khususnya, dengan metode ultrametod. Kerugian utama dari penelitian ini adalah ketaatan yang ketat terhadap kondisi steril untuk sampel dan bahan. Sedikit deviasi kadang-kadang menunjukkan kesimpulan analitis yang tidak akurat, mempersulit diagnosis dan pengobatan selanjutnya. Analisis PCR untuk penentuan hepatitis RNA tidak selalu yakin menunjukkan gambaran penyakit, kadang-kadang ketidakakuratan diperbolehkan, dan di kedua arah.

Mendiagnosis virus hepatitis, disarankan untuk menggunakan pemeriksaan yang komprehensif.

Norma indikator

Ketiadaan antibodi JgM terhadap virus hepatitis C dalam hasil penelitian dianggap norma dalam analisis reaksi berantai polimerase. Pada saat yang sama, temuan analisis serologis menunjukkan adanya antibodi terhadap virus C dan ini juga dalam kisaran normal. Definisi kualitatif tidak menunjukkan intensitas penyakit, hanya mengungkapkan agen penyebab hepatitis C di RNA. Analisis ini diulang setelah perawatan untuk mengkonfirmasi pemulihan yang sebenarnya.

Penyimpangan

Jika antibodi JgM untuk HCV RNA hadir, ini menunjukkan infeksi berkembang. Penyakit pada saat yang sama berlangsung secara akut atau kronis, diwujudkan dalam berbagai tahap. Jika penurunan jumlah antibodi dicatat, analisis akan menunjukkan bahwa hasil pengobatan dicapai selama pemulihan. Hanya kasus yang sangat langka dari positif palsu yang ditemukan dalam diagnosis. Mereka ditemukan pada wanita selama kehamilan dan pada orang dengan penyakit menular lainnya.

Decoding analisis PCR untuk hepatitis C

Sebuah penelitian laboratorium khusus - analisis PCR untuk hepatitis C - sangat menyederhanakan diagnosis penyakit virus ini. Hepatitis C tidak terkecuali, sedikit sampel darah dapat diuji untuk kandungan rna dan materi genetik lain dari agen virus. Semua individu dengan antibodi terhadap hepatitis C yang bersirkulasi dalam plasma darah menjadi sasaran analisis dengan PCR, yang keberadaannya mengkonfirmasi deteksi kualitatif.

Interpretasi hasil ditafsirkan dalam kolom bentuk penelitian sebagai analisis "positif" atau "negatif". Selain itu, menggunakan PCR adalah mungkin tidak hanya untuk menentukan konten virus minimum, tetapi juga untuk menghitung jumlah partikel. Dengan demikian, adalah mungkin untuk menentukan perkiraan viral load dan menentukan taktik perawatan medis seakurat mungkin.

Kerusakan hati virus

Hati sebagai unsur saluran pencernaan membutuhkan beban yang sangat besar. Dalam selnya, sebagian besar reaksi metabolisme semua jenis metabolisme terjadi, yang memastikan fungsi optimal semua organ dan sistem. Pada saat yang sama, nilai detoksifikasi sangat bagus untuk menghapus slag dan produk metabolik dengan empedu enzimatik.

Kekalahan hati oleh virus yang berbeda sifat sangat berbahaya bagi tubuh. Gambaran klinis yang beragam dan ketidakpatuhan terhadap pengobatan menyebabkan hepatitis ke tempat pertama dalam hal risiko kesehatan. Hepatitis C kronis dan bisa negatif untuk waktu yang lama, perlahan-lahan parasit dalam tubuh manusia. Virus ini ditularkan melalui cairan biologis: darah dan lebih jarang melalui air mani. Penyalahgunaan obat pada jarum suntik yang tidak steril, pengiriman alami wanita yang terinfeksi, cedera atau luka yang tidak disengaja oleh petugas kesehatan dapat mengakibatkan penularan virus ke orang yang sehat.

Diagnosis tepat waktu dari penyakit ini terhambat oleh gambaran klinis tersembunyi dan patologi yang tidak sistematis. Hasil positif mungkin hanya terlewatkan oleh analisis yang berkinerja buruk. Hanya kerusakan yang signifikan pada sel-sel hati yang menyebabkan gejala tertentu, namun efek negatif dari viremia pada saat itu tidak menyisakan kesempatan untuk memulihkan organ.

Obat modern telah mengembangkan metode khusus untuk mengenali sedikit jejak virus. PCR, IFA, biopsi hati dapat mendeteksi kerusakan terkecil pada hati dan tingkat antibodi minimum terhadap virus. Analisis dengan bantuan PCR adalah praktik diagnostik yang paling sederhana dan paling dapat diandalkan.

Analisis kualitatif

Inti dari reaksi polimerase adalah pembentukan urutan rna. Reaksi dilakukan di hadapan protein virus yang sama dalam plasma darah.

Katalis khusus memungkinkan Anda untuk mensintesis urutan virus yang serupa dari rantai, yang dibandingkan dengan nukleotida RNA virus yang diketahui. Berdasarkan ini, mereka menentukan viral load dan kerusakan hati.

PCR mampu menangkap bahkan satu kehadiran gen yang diinginkan dalam darah yang diambil. Reaksi berantai diagnostik seperti itu juga sangat spesifik. Urutan rantai nukleotida adalah unik untuk setiap makhluk, sehingga primer enzimatik membuat urutan identik dari informasi genetik yang diinginkan. Dengan demikian, setiap virus dapat dideteksi dengan akurasi sekecil apa pun, bahkan jika indikator kuantitatifnya sangat kecil.

Pasien yang darahnya ditemukan antibodi yang dihasilkan terhadap hepatitis virus, melakukan studi kualitatif PCR atau Eph. Hasil analisis bisa positif dan negatif, yang dalam kedua kasus membutuhkan perawatan.

Tanggapan positif dari reaksi berantai harus diuraikan sebagai kehadiran fragmen RNA dari virus hepatitis atau sebagai fenomena infeksi.

Dalam plasma darah pada saat virus secara aktif berkembang biak dan parasit di atas sel-sel hati. Diagnostik PCR dapat memberikan jawaban negatif jika ada beberapa partikel viral RNA yang ada dalam plasma, di bawah tingkat sensitivitas tes, atau tidak sama sekali. Setelah infeksi langsung, jumlah virus tumbuh relatif lambat, dan hanya setelah 1-2 minggu, jika atau penelitian kualitatif lainnya dapat mengisolasi mereka.

Analisis negatif dapat diperoleh dalam kasus-kasus berikut:

  1. Ketika mengambil materi dalam kondisi yang tidak tepat, mendapatkan sampel darah dengan kontaminasi;
  2. Ketika seorang pasien sebelumnya telah menerima suntikan heparin.
  3. Dengan adanya enzim dan substrat lain dalam sampel yang diambil yang mengganggu jalannya reaksi berantai.

Analisis kuantitatif

Tes kuantitatif sebagai diagnosis mikrobiologi dirancang untuk menentukan viral load. Analisis kualitatif yang dikonfirmasi untuk viremia berfungsi sebagai dasar untuk menentukan jumlah materi genetik dan konsentrasinya. Jumlah rna virus yang terdeteksi ditentukan dalam satuan volume darah, biasanya dalam 1 mililiter. Bahan yang dibutuhkan dinyatakan dalam unit internasional, beberapa laboratorium menggunakan jumlah salinan dalam analisis eif.

Biasanya, sebelum ada regimen terapeutik, PCR dianalisis secara kuantitatif. Menghitung viral rna dilakukan cukup sering: setelah satu, empat, dua belas dan dua puluh empat minggu. Minggu ke-12 dianggap indikatif, karena berdasarkan analisis, selama periode ini interpretasi efektivitas tindakan terapeutik dilakukan.

Analisis kuantitatif menggunakan PCR atau IFA melibatkan pengambilan sampel dari vena.

Interpretasi hasil sebagai viral load yang tinggi dimulai dari angka 800.000 IU / ml. Hasil positif untuk hepatitis C mencerminkan keberadaan setidaknya 3.000.000 eksemplar per mililiter darah. Tingkat viremia yang rendah berhenti pada 400.000 IU / ml. Hasil penelitian dapat berupa nilai sebagai respons negatif, serta indikator "di bawah rentang pengukuran."

Tes kuantitatif dengan perkiraan "di bawah rentang pengukuran" mengatakan bahwa selama reaksi itu tidak mungkin untuk menghitung RNA. Virus masih beredar di dalam tubuh, seperti yang ditunjukkan oleh tes kualitatif positif. Indikator negatif dari analisis kuantitatif pcr atau ifa menunjukkan tidak adanya rna dalam sampel darah ini.

Meskipun metode penularan virus melalui darah terbatas, risiko penularan virus melalui sekresi kelenjar seks dari ibu ke anak meningkat.

Analisis kuantitatif memberikan bantuan yang signifikan dalam mengevaluasi intervensi terapeutik. Ifa dan PCR mencerminkan tindakan obat antiviral, membantu menetapkan waktu terapi dan menilai pembentukan kekebalan pasien. Tanggapan negatif awal dari tes laboratorium menunjukkan perawatan yang berhasil dan kebutuhan untuk mengurangi durasi terapi. Penurunan viral load yang lambat dapat diartikan sebagai kebutuhan untuk memodifikasi terapi. Tingkat viral load menentukan prognosis penyakit. Hepatitis dengan tingkat rendah cenderung hanya diobati dan virus dapat sepenuhnya dihapus dari tubuh. Tingginya tingkat kehadiran virus dalam darah membutuhkan perhatian yang seksama dan pengobatan yang serba guna.

Penggunaan diagnostik PCR

Polymerase chain reaction (PCR) dalam biologi molekuler adalah metode eksperimental untuk mendeteksi virus. Hal ini memungkinkan Anda untuk secara signifikan meningkatkan konsentrasi fragmen asam nukleat tertentu (DNA) dalam sampel bahan biologis, yang memungkinkan untuk menentukannya (mengenali) dan menghitung.

Analisis dilakukan sebagai berikut. Materi genetik (sampel darah), yang berpotensi mencakup gen yang diinginkan, dimasukkan ke dalam tabung. Ada juga primer yang ditempatkan - segmen yang disintesis secara kimiawi dengan panjang kecil gen yang diinginkan.

DNA atau RNA polimerase juga ditambahkan ke bejana, ia mampu membentuk rantai asam nukleat yang benar-benar identik dengan yang asli. Komposisi yang dihasilkan disuntikkan dan satu set dari empat nukleotida bebas - bahan bangunan khusus untuk RNA atau DNA, salah satunya mengandung partikel fosfor radioaktif.

Campuran yang dihasilkan dipanaskan hingga 95-96 ° C, itulah sebabnya mengapa dua heliks DNA, yang biasanya terjalin, ditenun. Kemudian obat didinginkan, di mana primer itu sendiri menempel pada wilayah yang diinginkan dari genom virus, mencegah RNA (atau DNA) membentuk heliks ganda lagi.

Dalam proses pendinginan, polimerase mencari rantai nukleotida bebas. Untuk berfungsinya enzim ini diperlukan satu rantai nukleotida. Karena polimerase tergelincir di sepanjang rantai DNA (seperti cincin pada tali), ia tidak dapat bekerja pada heliks ganda.

Setelah ini, siklus pemanasan berulang dilakukan, karena rantai nukleotida yang dipisahkan. Pada masing-masing siklus PCR ini, jumlah sampel gen hepatitis yang diinginkan meningkat secara eksponensial, dan sisa materi genetik dihasilkan (tumbuh) secara linier.

Setelah pemurnian larutan dari residu nukleotida dan pemisahan dengan elektroforesis rantai DNA dengan parameter berat molekul, seseorang dapat dengan mudah menentukan apakah ada gen yang diinginkan dalam sampel yang diteliti atau tidak.

Manfaat PCR

Pengujian laboratorium menggunakan PCR memungkinkan lebih banyak informasi yang bisa diperoleh daripada kehadiran RNA virus. Dengan menentukan parameter tingkat radiasi radioaktif, adalah mungkin untuk mengidentifikasi berapa banyak materi genetik yang awalnya terkandung dalam sampel yang diteliti. Dalam kasus hepatitis, tentukan indikator tingkat viral load.

Keuntungan lain dari metode ini adalah tingkat sensitivitas reaksi CR yang sangat tinggi. Ini jauh lebih tinggi daripada metode klasik mendeteksi virus. Idealnya, untuk mengidentifikasi gen yang diinginkan, untuk PCR, hanya satu virus dalam sampel yang cukup.

Selain itu, PCR benar-benar spesifik. Primer-nya dirancang sedemikian rupa sehingga sepenuhnya sesuai dengan wilayah unik dari gen yang diinginkan yang tidak dimiliki urutan lain. Seperti sidik jari yang unik, ada urutan nukleotida unik di setiap gen.

Analisis kualitatif PCR

Analisis kualitatif memungkinkan Anda mengidentifikasi hanya keberadaan virus dalam darah. Tes ini harus dilakukan untuk semua pasien yang antibodi terhadap hepatitis C ditemukan dalam darah, hanya dapat menghasilkan satu dari dua nilai: "terdeteksi" atau "tidak terdeteksi." Pada orang yang sehat, norma (nilai referensi) harus "tidak terdeteksi".

Ada interpretasi khusus dari hasil riset kualitatif semacam itu:

  • Hasilnya adalah "terdeteksi." Ini berarti bahwa fragmen RNA yang spesifik untuk virus hepatitis C ditemukan dalam sampel yang dianalisis dari bahan biologis yang diambil. Akibatnya, ada fakta bahwa pasien terinfeksi dengan virus hepatitis C. Jika hasil PCR berkualitas tinggi "terdeteksi", ini menunjukkan bahwa virus mengalikan dan saat ini menginfeksi sel-sel hati baru di tubuh.
  • Hasilnya adalah "tidak terdeteksi." Seperti putusan menunjukkan bahwa dalam sampel yang dianalisis dari bahan biologis yang diperoleh di laboratorium ini, tidak ada fragmen RNA yang ditemukan yang spesifik untuk virus hepatitis C. Sebagai alternatif, konsentrasi RNA infeksi patogen dalam sampel ini berada di bawah batas sensitivitas tes.

Pada fase akut RNA virus hepatitis C, penelitian kualitatif dengan metode PCR dapat dideteksi setelah 1-2 minggu segera setelah infeksi tubuh, yaitu jauh sebelum munculnya antibodi terhadap hepatitis itu sendiri.

Hasil tes yang tidak akurat dari penelitian ini dapat diperoleh dengan:

  • biomaterial yang terkontaminasi;
  • kehadiran heparin dalam darah pasien;
  • kehadiran dalam sampel zat kimia atau protein (inhibitor) yang mempengaruhi berbagai komponen PCR.

Untuk melakukan analisis kualitatif PCR, tidak diperlukan persiapan khusus dari pasien untuk penelitian. Darah vena digunakan sebagai bahan.

Evaluasi hasil

Tes PCR berkualitas tinggi memiliki tingkat kepekaan tertentu, dan tergantung pada keakuratan penelitian dan tingkat peralatan di laboratorium dapat bervariasi dari 10 hingga 500 IU / ml.

Ini berarti bahwa jika virus dalam sampel darah hadir dalam konsentrasi yang sangat rendah (kurang dari nilai ambang sensitivitas dari laboratorium ini), maka hasilnya dapat ditentukan sebagai "tidak terdeteksi" pada pasien pasien. Karena itu, ketika melakukan analisis kualitatif PCR dengan tingkat viremia rendah (konsentrasi virus rendah), misalnya, untuk pasien yang menjalani terapi antivirus, sangat penting untuk mengetahui ambang sensitivitas sistem diagnostik ini.

Varian sistem diagnostik

Untuk mengontrol tanggapan virologi, disarankan untuk menggunakan sistem diagnostik dengan ambang batas sensitivitas paling sedikit 50 IU / ml untuk pengobatan antiviral. Kriteria ini dipenuhi, misalnya, dengan alat tes Cobas Ampicolor HCV-Test (akurat hingga 50 IU / ml), serta RNA HCV RealBest (dengan sensitivitas 15 IU / ml).

Menurut rekomendasi WHO, untuk menetapkan diagnosis definitif hepatitis C, penting untuk hanya berdasarkan tiga kali deteksi RNA virus C dalam sampel serum pasien, dengan tidak adanya varietas penanda hepatitis lainnya.

Selain metode PCR, tes TMA (metode amplifikasi transkripsi) juga digunakan untuk mendeteksi RNA HCV pada pasien. Ini memiliki ambang batas sensitivitas terbaik (5-10 IU / ml), tetapi di negara kita metode pengujian seperti ini belum umum.

Rentang modifikasi virus yang terdeteksi

Penentuan kualitatif seperti dalam serum kehadiran RNA dari virus hepatitis C memungkinkan untuk menentukan beberapa genotipe dari virus ini. Saat ini, sains mengetahui lebih dari enam genotipe virus ini, serta sekitar 10 subtipe penyakit ini.

Di negara kita, virus umum 1, 2, 3 genotipe. Laboratorium dapat mendeteksi genotipe berikut: 1a dan 1b, 2a, 2b dan 2c, serta 3, 4, 5a dan 6, terlepas dari subtipe. Untuk semua modifikasi virus, spesifisitas deteksi adalah 100%.

Analisis Kuantitatif PCR

Dengan bantuan tes PCR kuantitatif, tingkat konsentrasi virus hepatitis dalam sampel darah (viral load) ditentukan. Tes ini untuk viremia (konsentrasi virus) memungkinkan Anda untuk menentukan jumlah unit bahan genetik tertentu (RNA virus paling banyak), yang terdeteksi dalam jumlah tertentu. Dalam hal ini, tentukan konsentrasinya dalam 1 ml, yang sesuai dengan 1 cu. lihat

Parameter kuantitatif analisis dinyatakan dalam angka, untuk tujuan ini satuan internasional (IU) per mililiter (ml), disebut sebagai IU / ml, digunakan sebagai unit pengukuran. Sekarang di beberapa laboratorium, jumlah virus dapat ditentukan dalam unit lain: jumlah salinan per ml ditunjukkan sebagai salinan / ml.

  • Kurma Untuk hepatitis C, analisis kuantitatif PCR dilakukan segera sebelum dimulainya terapi. Kemudian pada tanggal 1, 4, 12 dan 24 minggu. Evaluasi pada minggu ke 12 adalah indikasi, ini memungkinkan untuk menentukan efektivitas terapi.
  • Persiapan untuk analisis. Untuk melakukan analisis kuantitatif PCR, tidak diperlukan persiapan khusus dari pasien untuk penelitian. Setengah jam sebelum pengambilan sampel tidak boleh merokok. Darah vena digunakan sebagai bahan laboratorium.

Evaluasi hasil

Untuk sistem uji laboratorium yang berbeda, ada faktor konversi yang berbeda untuk indikator ini dalam IU / ml. Rata-rata, mereka mengambil parameter konversi, di mana 4 salinan / ml = 1 IU / ml. Artinya, misalnya, jika laboratorium memberikan hasil analisis PCR 2.4 * 10 6 salinan / ml, maka parameter ini harus dibagi menjadi 4 dan kita akan mendapatkan 6 * 10 5 IU / ml.

Beban 800.000 IU / ml dianggap tinggi, yang kira-kira setara dengan 3.000.000 eksemplar / ml. Viremia rendah, menurut beberapa penulis, sesuai dengan parameter PCR kuantitatif di bawah 400.000 IU / ml.

Sebagai hasil dari tes kuantitatif, hasil akhir dapat dikirimkan tidak dalam bentuk nilai digital, tetapi: "di bawah rentang pengukuran", atau "tidak terdeteksi".

  • Penilaian: "di bawah rentang pengukuran." Ini menunjukkan bahwa tes kuantitatif tidak dapat mendeteksi RNA virus hepatitis C, tetapi virus itu sendiri ada di dalam tubuh dalam konsentrasi yang sangat rendah. Ini dibuktikan dengan tes kualitatif tambahan, mengkonfirmasi fakta keberadaan virus.
  • Rating: tidak terdeteksi. Hasil ini menunjukkan bahwa tes kuantitatif tidak ditemukan dalam sampel RNA virus.

Parameter viral load, pertama-tama, menentukan tingkat penularan penyakit, tingkat "infeksi" pasien. Semakin tinggi konsentrasi virus pasien, semakin besar kemungkinan diteruskan ke orang lain. Misalnya, saat berhubungan seksual dengan orang yang sakit, atau secara vertikal. Indikator kuantitatif ini juga membantu menentukan efektivitas perawatan pasien.

Melakukan analisis kuantitatif CCP penting untuk terapi antiviral, menilai keberhasilannya dan merencanakan durasi pelatihan. Dengan demikian, dengan respons tubuh yang cepat terhadap pengobatan dan tingkat viremia yang rendah, durasi terapi dapat dipersingkat.

Jika parameter PCR kuantitatif secara perlahan dikurangi, terapi antiviral harus diperpanjang atau dimodifikasi. Jika tingkat viral load rendah, maka ini adalah faktor yang menguntungkan untuk terapi, tetapi jika meningkat, maka metode pengobatan yang digunakan tidak efektif dan obat atau metode penggunaannya harus diubah.

No 321СВ, virus hepatitis C, definisi kualitas RNA. (HCV-RNA, kualitatif) dalam serum

Penentuan RNA virus hepatitis C (HCV) dalam serum dengan metode polymerase chain reaction (PCR) dengan deteksi dalam mode "real time".

Fragmen yang terdeteksi adalah wilayah spesifik dari RNA virus hepatitis C. Genotipe yang terdeteksi: 1a, 1b, 2a, 2b, 2c, 2i, 3, 4, 5a, 6, terlepas dari subtipe. Kekhususan definisi ini adalah 100%. Sensitivitas deteksi adalah 60 IU / ml.

  • Tanda-tanda klinis hepatitis.
  • Penelitian skrining profilaksis (Hepatitis C virus RNA adalah penanda awal untuk infeksi akut).
  • Survei orang-orang yang dapat dihubungi.
  • Diagnosis hepatitis etiologi campuran - identifikasi virus terkemuka.
  • Identifikasi tahap replikasi aktif dari virus dalam kondisi kronis.
  • Memonitor efektivitas terapi.
  • Sirosis hati.

Interpretasi hasil penelitian mengandung informasi untuk dokter yang hadir dan bukan diagnosis. Informasi dalam bagian ini tidak dapat digunakan untuk diagnosis diri dan perawatan diri. Diagnosis yang akurat dibuat oleh dokter, menggunakan kedua hasil pemeriksaan ini dan informasi yang diperlukan dari sumber lain: anamnesis, hasil pemeriksaan lain, dll.

Analisis kualitatif dan kuantitatif PCR untuk hepatitis C: negatif, positif, transkrip

Hepatitis C adalah penyakit hati virus yang disebabkan oleh flavivirus HCV (dari kata bahasa Inggris hepatitis C virus), struktur yang mengandung molekul asam ribonukleat (RNA). RNA membawa kode genetik dari virus. Kehadirannya memungkinkan untuk analisis PCR untuk hepatitis C.

Bahaya HCV bagi seseorang terletak pada fakta bahwa apa yang disebut jendela serologis (waktu antara infeksi dan munculnya reaksi dari sistem kekebalan) bisa sangat panjang - dari beberapa minggu hingga enam bulan.

Ia tidak mendeteksi infeksi dan memulai perawatan tepat waktu.

Tergantung pada karakteristik individu dari organisme, pembawa HCV dapat memanifestasikan dirinya dalam bentuk akut, serta terjadi sebagai penyakit kronis yang akan memerlukan perawatan yang panjang dan mahal. Ketika antibodi terhadap HCV terdeteksi, serangkaian tes laboratorium dilakukan, termasuk PCR untuk hepatitis C. Tes ini dilakukan untuk semua orang yang antibodi darahnya terhadap HCV telah ditemukan.

Apa itu analisis PCR?

Analisis laboratorium PCR untuk hepatitis C - studi bahan biologis untuk mendeteksi keberadaan flavavirus.

Polymerase chain reaction (sebagai singkatan singkatan) menunjukkan nilai kuantitatif dari lesi virus tubuh, karakteristik kualitatifnya, serta genotipe virus yang mengandung RNA.

Atas dasar mereka, serta atas dasar analisis tambahan, metode dan durasi terapi, serta faktor epidemiologi (tingkat risiko penularan ke operator lain) ditentukan.

Apa itu Analisis RNA C RNA?

Hepatitis C PCR juga disebut analisis RNA (HCV RNA), karena Flavavirus mengandung partikel RNA dengan ukuran virion 30-60 nm. Salah satu fitur dari mikroorganisme ini adalah kecenderungan tinggi untuk mutasi.

Masing-masing subspesies (genotipe) dari virus memiliki ketahanan yang berbeda, yang menyebabkan metode pengobatan yang berbeda dan sifat prognosis lebih lanjut untuk pasien.

Bahan biologi (darah vena) diberikan pada perut kosong dan, sebagai suatu peraturan, diuji dengan metode PCR Real-Time (diagnostik real-time yang sangat sensitif dengan batas deteksi yang lebih rendah 15 IU / ml menggunakan sistem otomatis tertutup).

Ada tes lain, misalnya COBAS AMPLICOR dengan sensitivitas 50-100 IU / ml. Untuk setiap uji laboratorium, ambang sensitivitas penting, yaitu kemampuan reagen untuk mendeteksi konsentrasi minimum virus dalam bahan biologis.

Jenis analisis untuk hepatitis C oleh PCR

Hepatitis C PCR mencakup tiga komponen penting:

  • analisis kualitatif;
  • analisis kuantitatif;
  • genotyping.

Tes-tes ini memungkinkan Anda untuk menentukan sifat viremia, serta ciri-ciri genetik dari patogen. Tergantung pada sensitivitas sistem diagnostik, penelitian dilakukan sekali, dan kadang-kadang tes kedua dilakukan dengan pereaksi yang lebih sensitif untuk mengkonfirmasi atau memperbaiki hasilnya.

PCR hepatitis C berkualitas tinggi

Analisis PCR hepatitis C kualitatif adalah nama umum lain untuk analisis reaksi berantai polimerase. Sensitivitas standar dari tes, yang memungkinkan untuk mendeteksi keberadaan lesi virus, adalah dalam kisaran 10-500 IU / ml.

Analisis PCR negatif untuk hepatitis C menunjukkan bahwa konsentrasi virus dalam darah pasien berada di bawah ambang kerentanan sistem diagnostik.

Jika PCR berkualitas tinggi memberikan jawaban "tidak terdeteksi", maka untuk pengobatan selanjutnya penting untuk mengetahui ambang sensitivitas reagen.

Fraksi protein terhadap flavavirus muncul jauh kemudian.

PCR Kuantitatif Hepatitis C

PCR hepatitis C kuantitatif adalah indikator viral load, yang mencerminkan tingkat konsentrasi RNA flavavirus dalam tubuh. Ini adalah indikator yang menunjukkan berapa banyak fragmen RNA virus yang terkandung per sentimeter kubik darah. Hasil PCR RNA hepatitis C dalam tes kuantitatif dalam sistem konvensional ditunjukkan dalam unit internasional per mililiter (IU / ml) dan dapat direkam dengan cara yang berbeda, misalnya, 1,7 juta atau 1.700.000 IU / ml.

Diagnostik PCR kuantitatif hepatitis C diresepkan untuk pasien sebelum memulai terapi antiviral, dan pada minggu ke 12 pengobatan, untuk mengevaluasi hasil dari metode yang dipilih untuk menangani HCV. Viral load memungkinkan untuk menentukan tiga indikator penting dari penyakit:

  • infektivitas, yaitu tingkat risiko penularan virus dari satu karier ke yang lain (semakin tinggi konsentrasi RNA virus flava, semakin tinggi kemungkinan menginfeksi orang lain, misalnya, melalui kontak seksual);
  • metode dan efektivitas pengobatan;
  • durasi dan prognosis dari terapi antiviral (semakin tinggi viral load, semakin lama perawatan berlangsung).

Diagnostik PCR kuantitatif hepatitis C tergantung pada jenis tes laboratorium dan ambang sensitivitasnya. Batas bawah norma dianggap indikator hingga 600.000 IU / ml, nilai rata-rata berada di kisaran 600.000-700.000 IU / ml. Hasil 800.000 IU / ml dan di atas dianggap tingkat tinggi virus yang mengandung RNA.

Genotyping

Karena aktivitas mutasi HCV yang tinggi di alam, ketika pengujian penting untuk mengidentifikasi genotipe virus mana dalam darah pasien. Secara total, 11 genotipe virus hepatitis C telah tercatat di planet ini, yang mencakup banyak subspesies (subtipe). Di wilayah Federasi Rusia didistribusikan 1,2 dan 3.

RNA PCR Hepatitis C bersama dengan genotyping adalah komponen yang sangat penting dari analisis, karena memungkinkan dokter menentukan resistensi (resistansi) virus, memilih obat yang tepat dan meresepkan pengobatan.

Genotyping juga memungkinkan Anda untuk secara tidak langsung menentukan keadaan hati. Sebagai contoh, 3 genotipe HCV sering disertai dengan steatosis, di mana lemak terakumulasi dalam sel-sel organ.

Tes darah untuk PCR untuk hepatitis C harus menghasilkan angka yang menentukan genotipe. Tanggapan laboratorium dapat mengatakan "tidak diketik" - dan ini berarti bahwa virus ada dalam darah manusia yang tidak terdeteksi oleh sistem uji. Ini mungkin menunjukkan bahwa genotipe tidak khas untuk suatu wilayah geografis tertentu. Dalam hal ini, Anda harus mengulang analisis dengan sensitivitas sistem diagnostik yang lebih tinggi.

Decoding analisis PCR untuk hepatitis C

Tes untuk dekripsi kuantitatif PCR hepatitis C dapat didasarkan pada data di atas. Ketika memperoleh hasil tes laboratorium, data berikut biasanya ditulis:

  • "Ditemukan" / "tidak ditemukan" (PCR berkualitas tinggi untuk hepatitis C);
  • jumlah fraksi yang mengandung RNA, misalnya 831.680 ME / ml (analisis PCR kuantitatif);
  • gambar yang menentukan genotipe HCV, misalnya - 1, 2, 3, 4;
  • Nama tes ini paling sering Real-time.

Yang paling penting dalam mengartikan analisis PCR untuk hepatitis C adalah paragraf kedua, yang menunjukkan viral load, yang menentukan prognosis, metode dan durasi pengobatan.

Jika tes PCR untuk hepatitis C negatif, dan ELISA positif - apa artinya ini?

Untuk menguraikan tes laboratorium, penting untuk menghubungi ahli hepatologi atau spesialis penyakit menular yang akan menjelaskan informasi yang diperoleh sesuai dengan jenis sistem diagnostik dan ambang batas sensitivitasnya. Dalam praktek medis, ada banyak data tes darah yang dapat menyesatkan seseorang tanpa pendidikan medis.

Sebagai contoh, jika tes untuk PCR hepatitis C negatif, dan ELISA positif, itu mungkin berarti bahwa tidak ada HCV dalam darah pasien saat ini, tetapi sebelumnya ia menderita bentuk akut hepatitis C. Hal ini diyakini bahwa enzim immunoassay positif (ELISA) menunjukkan bahwa ada antibodi dalam darah yang telah diproduksi setelah invasi virus di masa lalu. Tetapi dalam praktek medis modern, analisis ELISA dianggap tidak cukup andal dan sering memberikan hasil yang tidak biasa, sehingga dokter menggunakannya sebagai skrining primer. Ketika mendiagnosis suatu penyakit, spesialis dipandu secara tepat oleh tes PCR.

Video yang berguna

Video berikut memberikan deskripsi yang sangat rinci dan menarik tentang esensi metode PCR, bagaimana analisis dilakukan:

Kesimpulan

Untuk analisis PCR untuk hepatitis C, darah vena biasanya diambil. Paling sering ada asupan ganda bahan biologis - untuk ELISA, dan langsung untuk tes PCR. Untuk hasil tes yang benar, kepatuhan dengan aturan dasar untuk pengambilan sampel laboratorium dari bahan biologis diperlukan:

  • darah untuk analisis diberikan pada paruh pertama hari dengan perut kosong;
  • antara makan dan pengambilan sampel darah harus memakan waktu minimal 8 jam;
  • alkohol dan makanan yang digoreng juga harus dikeluarkan sebelum mengambil tes;
  • selama sehari sebelum menyumbangkan darah, perlu untuk menghindari aktivitas fisik yang tinggi.

Hasil tes darah biasanya siap pada hari berikutnya.

Diagnosis dengan PCR untuk Hepatitis C

Tidak semua orang tahu mengapa mereka menggunakan metode diagnostik PCR untuk hepatitis C. Salah satu kelompok penyakit yang paling banyak tersebar adalah penyakit infeksi pada saluran cerna. Paling sering, perut (bisul), usus (kolitis, enteritis) dan hati (hepatitis) menderita.

Di antara semua organ yang tercantum di atas, beban terbesar dikenakan pada hati. Di dalam tubuh, peran hati sangat penting:

  1. Hampir semua reaksi metabolisme terjadi di hati (ini adalah tempat semua jenis komponen vital terbentuk yang memungkinkan tubuh berfungsi sepenuhnya).
  2. Hati adalah organ detoksifikasi utama. Dengan bantuannya (khususnya melalui empedu), banyak substrat dikeluarkan yang dapat menyebabkan keracunan dan menyebabkan konsekuensi serius.

Sayangnya, banyak orang tidak memantau kesehatan mereka, karena apa yang hati mulai menderita. Hepatitis berbagai etiologi (virus, beracun) biasanya berkembang.

Definisi hepatitis

Viral hepatitis menempati tempat yang penting di antara penyakit hati. Tingkat keparahan perjalanan penyakit, kompleksitas perawatan menempatkan mereka di tempat pertama di antara patologi sifat lain dari organ ini.

Semua hepatitis dibagi menjadi akut dan kronis. Hepatitis A dan B diklasifikasikan sebagai akut. Di antara hepatitis C kronis muncul lebih dulu.

Penyakit ini disebabkan oleh virus hepatitis C. Ciri khasnya adalah penyakit ini dapat bertahan lama tanpa manifestasi klinis.

Ini ditularkan terutama melalui darah. Dengan aliran darah, virus memasuki hati, di mana ia mulai berkembang biak di sel-selnya. Sebagai akibat dari akumulasi virion, penghancuran hepatosit yang terinfeksi terjadi. Sebagai tanggapan, antibodi mulai diproduksi, yang mulai menyerang sisa-sisa hepatosit. Karena ini, kolam melawan sel-sel hati dikembangkan dari waktu ke waktu, yang memperburuk perjalanan penyakit.

Karena fakta bahwa penyakit ini tidak bergejala atau tidak bergejala, dan tanda-tanda klinis hanya muncul dengan kerusakan sel yang signifikan, penyakit ini memerlukan penciptaan metode diagnostik untuk mendeteksi keberadaannya dan mengambil tindakan yang tepat.

Diagnosis hepatitis C: analisis kualitatif dan kuantitatif

Saat ini, untuk diagnosis hepatitis C menggunakan metode seperti biopsi hati, imunogram.

Mereka memungkinkan Anda untuk secara langsung menentukan keberadaan hepatosit yang terinfeksi (suatu spesimen biopsi hati) atau antibodi spesifik terhadap sel-sel yang terkena (immunogram). Namun, ada metode yang memungkinkan Anda menentukan keberadaan virus itu dengan andal. PCR ini adalah reaksi berantai polimerase.

Inti dari metode ini terletak pada kenyataan bahwa dalam kondisi tertentu, produksi rantai RNA terjadi. Hal ini disebabkan oleh fakta bahwa ada fragmen partikel virus dalam darah atau biopsi yang dimaksud. Ketika menghubungkan mereka dengan beberapa molekul dalam medium, sintesis rantai pelengkap RNA virus terjadi. Dalam analisis dan perbandingan berikutnya dengan urutan nukleotida virus hepatitis C yang diketahui, adalah mungkin untuk menentukan apakah virus ada dalam tubuh dan apakah ada kerusakan hati.

PCR dilakukan setelah deteksi antibodi spesifik dalam darah melawan virus hepatitis. Setelah tes, hasilnya dibuat - RNA "terdeteksi" atau "tidak terdeteksi". Kadang-kadang dia mungkin mengatakan "tidak cukup bahan" - dalam hal ini, perlu mengulang analisis untuk hepatitis C.

Jika jumlah partikel virus kurang dari jumlah minimum yang diperlukan, maka kita dapat mengatakan bahwa tidak ada hepatitis, dan jumlah minimal bahan genetik bisa "membingungkan" karena mimikri materi genetik atau beberapa urutan nukleotida yang dapat bertepatan dengan virus.

  1. Dengan PCR, hasil negatif dapat diamati ketika memang ada partikel virus dalam darah, tetapi mereka sangat kecil (infeksi terjadi baru-baru ini atau analisis didahului oleh terapi antivirus jangka panjang dan intensif) bahwa sistem tes tidak dapat menentukan konsentrasi mereka dengan tepat. RNA - "tidak terdeteksi."
  2. Jika PCR memiliki hasil positif, maka ada begitu banyak partikel virus dalam darah yang jumlahnya melebihi ambang batas sensitivitas yang lebih rendah dari sistem tes. Dalam hal ini, ada risiko tinggi mengembangkan proses infeksi (atau sudah ada dalam tahap yang agak maju). Biasanya, jumlah virus yang tinggi sudah merupakan indikasi untuk perawatan dan transplantasi hati berikutnya.

Kadang-kadang tes bisa menjadi positif atau salah palsu negatif.

Hasil PCR negatif palsu dari hepatitis diamati ketika ada beberapa komponen dalam media reaksi yang menghambat pembentukan salinan partikel virus. Karena itu, tidak mungkin untuk mendapatkan gambaran yang benar tentang keadaan darah, yang berkontribusi pada perjalanan virus dan perkembangan penyakit. Kehadiran heparin dalam darah juga dapat mempengaruhi reaksi (dengan mengurangi viskositas relatif darah). Interpretasi yang tidak benar dari analisis dimungkinkan bahkan ketika kondisi transportasi dan penyimpanan bahan yang diteliti tidak dipenuhi.

Hasil positif palsu, ketika hepatitis C didiagnosis, PCR paling sering terjadi ketika tabung atau lingkungan kerja terkontaminasi. Selain itu, hasil positif dapat diamati di hadapan kelompok lain virus hepatitis (karena reaksi silang).

Analisis kualitatif PCR untuk mendeteksi hepatitis C

Kehadiran dalam darah sejumlah besar cryoglobulin juga secara langsung mempengaruhi perilaku PCR. Karena ini, sangat penting untuk menentukan konsentrasi mereka dalam darah sebelum pengujian untuk hepatitis C untuk mendeteksi distorsi hasil di muka dan mencegahnya.

Setelah tes ini, menjadi jelas apakah ada partikel virus dalam darah. Ketika menentukan mereka, dianjurkan untuk segera memulai terapi antiviral untuk memperlambat perkembangan proses. Tidak seperti hepatitis B, tidak ada obat lengkap untuk hepatitis C; penyakit hanya lolos ke tahap laten dan mulai berjalan lebih lambat. Kerusakan hati tidak bisa dihindari. Pada tahap terakhir dari proses, ketika hati tidak lagi dapat mengatasi fungsinya, mungkin perlu untuk transplantasi.

Perawatan dilakukan terutama dengan dua obat - interferon dan ribavirin.

Terbukti keefektifannya dalam memperlambat proses kekalahan hepatosit. Sepanjang jalan, terapi infus perlu diresepkan untuk memfasilitasi kerja hati.

Semua pasien yang telah melihat peningkatan jumlah partikel virus dalam darah selalu terdaftar dengan ahli hepatologi. Beberapa kali setahun, mereka direkomendasikan untuk menjalani pemeriksaan preventif untuk menentukan perkembangan proses dan deteksi tepat waktu indikasi untuk transplantasi. Selain itu, adalah mungkin untuk menggunakan hepatoprotectors, meskipun pendapat para dokter agak berbeda. Beberapa percaya bahwa obat-obatan ini memungkinkan Anda untuk menangguhkan proses dan melindungi hepatosit yang tidak terpengaruh; yang lain yakin bahwa tidak ada gunanya meminumnya, dan terapi antiviral intensif harus dilakukan.

Dengan demikian, hepatitis C termasuk kategori penyakit, identifikasi yang menghadirkan beberapa kesulitan. Memperbaiki metode diagnostik, serta pemeriksaan pencegahan yang tepat waktu akan mengurangi insiden penyakit ini. Yang penting adalah pencegahan penyakit ini. Satu harus hati-hati menghindari kontak dengan darah, menolak untuk mengambil obat, hanya kemudian penyakit ini akan diberantas. Hal utama dalam pencegahan dan pengobatan adalah sikap sadar pasien terhadap kesehatan mereka.

Analisis PCR Hepatitis

PCR untuk hepatitis C

  1. Hepatitis C RNA ("PCR kualitatif") - deteksi dalam tes darah adalah bukti hepatitis C akut atau kronis. Hal ini ditentukan dari minggu ke-2 infeksi, muncul sebelum anti-HCV, yang memungkinkan Anda untuk mendiagnosis penyakit pada tahap awal. RNA ditentukan pada pasien dengan klinik hepatitis akut dan pada mereka dengan hasil hepatitis positif.
  2. Hepatitis C RNA ("PCR kuantitatif") - viral load adalah salah satu indikator efektivitas terapi antivirus dan penilaiannya (oleh perubahan tingkat dari nilai awal). Karakterisasi kuantitatif dari konten RNA hepatitis C penting untuk menilai efektivitas terapi antiviral dan memiliki signifikansi prognostik untuk menentukan kronisitas. Pasien dengan viral load yang tinggi (jumlah RNA tinggi) sebelum pengobatan berespon kurang baik terhadap pengobatan.
  3. Hepatitis C RNA (genotipe 1, 2, 3) - jenis taktik pengobatan dan keefektifannya tergantung pada jenisnya. Penyakit yang disebabkan oleh virus genotipe 1 adalah yang paling tidak baik dalam kaitannya dengan prediksi efektivitas terapi. Menurut rekomendasi saat ini, tes darah bagi kita untuk genotipe hepatitis C harus dilakukan pada pasien sebelum dimulainya terapi antiviral.
  4. Hepatitis C RNA (diperpanjang genotyping 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5, 6) - 1a, 1b, 2a, 2c, 2k, 3a subtipe beredar di Rusia. Hepatitis C, yang disebabkan oleh genotipe 1 dan 4 virus, adalah yang paling tidak baik untuk prognosis.
  5. Ultrasensitif Hepatitis C PCR (metode kualitatif) - analisis ini digunakan untuk mendiagnosis penyakit pada tahap awal infeksi, optimal untuk menguji darah donor dan mengevaluasi respon terhadap pengobatan antivirus. Penelitian ini, bahkan tanpa deteksi antibodi terhadap virus hepatitis C, direkomendasikan untuk pasien dengan penyakit hati penyebab yang tidak spesifik, imunodefisiensi didapat, atau menerima terapi imunosupresif.
  6. Ultra-sensitive Hepatitis C PCR (metode kuantitatif) adalah tes sensitivitas tinggi yang unik (10 IU / ml) untuk menentukan RNA virus hepatitis C secara kuantitatif. Penelitian ini digunakan untuk memantau efektivitas terapi.

PCR untuk hepatitis B

  1. DNA Hepatitis B (analisis kualitatif) adalah indikator penggandaan virus hepatitis B. Ini muncul pertama kali dalam darah, rata-rata, 1 bulan setelah infeksi. Dalam beberapa kasus, adalah satu-satunya penanda infeksi HBV laten. Menentukan DNA virus memungkinkan seseorang untuk mendiagnosis hepatitis B yang disebabkan oleh strain mutan, yang tidak mengungkapkan penanda infeksi lainnya.
  2. Hepatitis B DNA (analisis kuantitatif) - Konsentrasi DNA (viral load) adalah salah satu tes untuk menentukan stadium hepatitis B kronis dan kriteria efektivitas terapi antivirus. Analisis dilakukan sebelum dan selama proses pengobatan.
  3. Genotyping hepatitis B - penyakit yang disebabkan oleh genotipe yang berbeda dari virus mungkin berbeda dalam hal klinis dan hasil. Hepatitis B, yang disebabkan oleh genotipe C virus, lebih mungkin untuk mengambil kursus kronis dan memiliki risiko tinggi transformasi menjadi sirosis hati atau karsinoma hepatoseluler. Pasien yang terinfeksi dengan genotipe A merespon lebih baik terhadap pengobatan.
  4. PCR DNA ultrasensitif untuk hepatitis B (metode kualitatif) - mereka diserahkan untuk deteksi dini penyakit ini. Sangat informatif dalam studi donor darah. Ini dapat digunakan untuk mengkonfirmasi penghapusan virus secara spontan atau diinduksi oleh pengobatan dari tubuh manusia.
  5. PCR yang sangat sensitif untuk hepatitis C (metode kuantitatif) - diagnosis DNA virus hepatitis B secara kuantitatif. Analisis dilakukan untuk menilai efektivitas terapi.
  6. Penentuan mutasi resistansi terhadap obat antiviral lamivudine, telbivudine, entecavir, adefovir, tenofovir (diserahkan bersama dengan analisis "DNA hepatitis B kuantitatif"). Penting untuk menyerahkan analisis kepada pasien dengan hepatitis B kronis sebelum memulai terapi antiviral dan saat mengambil obat. Hasilnya berisi informasi tentang keberadaan resistensi virus hepatitis B terhadap obat antiviral:
    • R - virus resisten terhadap obat antiviral (mutasi resistansi terhadap obat ini ditemukan);
    • S - virus hepatitis B sensitif terhadap obat (nilai normal, mutasi resistan tidak terdeteksi);
    • I - agen penyebab infeksi dapat mengembangkan resistansi terhadap obat ini.

Penelitian PCR untuk hepatitis C: jenis, indikasi, transkrip

Viral hepatitis C adalah penyakit serius yang terjadi dengan kerusakan pada hati. Dalam delapan puluh persen pasien, itu menjadi kronis. Virus berkembang biak di sel-sel hati - hepatosit - dan menyebabkan kematian mereka. Jaringan mati digantikan oleh fokus jaringan ikat, fibrosis berkembang.

Ketika fibrosis berkembang, hati tidak dapat melakukan fungsinya, sirosis hati dimulai, yang berbahaya karena komplikasinya: peningkatan tekanan dalam sistem vena portal, perdarahan gastrointestinal, gangguan pembekuan darah, perubahan mental karena kerusakan pada nuklei otak.

Penyebab penyakit ini adalah infeksi oleh virus dari keluarga Flaviviridae, yang termasuk jenis virus RNA. Ini berarti bahwa bahan genetik dimana protein dari patogen disintesis dikodekan dalam molekul asam ribonukleat. Infeksi terjadi melalui darah, seksual, dan dari wanita hamil ke janin. Sayangnya, waktu yang cukup lama dapat terjadi antara infeksi dan dimulainya produksi antibodi - dari dua minggu hingga enam bulan. Ini tidak memungkinkan untuk menentukan infeksi dengan metode immunoassay dan memulai perawatan pada tahap awal.

Apa itu analisis PCR?

PCR adalah metode analisis molekuler, yang memungkinkan untuk mendeteksi bahan genetik dari patogen yang sudah ada dalam minggu pertama setelah infeksi menggunakan reaksi berantai polymerase. Studi ini memiliki spesifisitas yang tinggi, akurasi, dan memungkinkan tidak hanya untuk menentukan ada tidaknya virus, tetapi juga konsentrasi dan genotipe.

Untuk penelitian, darah pasien diambil di mana RNA virus berpotensi berada. Primer ditambahkan ke darah - daerah buatan yang disintesis dari gen yang diinginkan dengan panjang kecil, dan RNA polimerase adalah enzim khusus yang berulang kali meningkatkan jumlah materi genetik patogen. Dengan menggunakan peralatan khusus, beberapa siklus pemanasan dan pendinginan dilakukan. Kemudian bahan dianalisis dan dibandingkan dengan gen virus yang diketahui, atas dasar kesimpulan yang dibuat tentang ada atau tidak adanya infeksi.

Jenis analisis PCR untuk hepatitis C

Ada tiga jenis analisis PCR:

  1. Analisis kualitatif PCR. Tahap pertama penelitian. Ini memungkinkan Anda mengidentifikasi bahan genetik virus di dalam darah.

  • Analisis kuantitatif PCR. Memungkinkan Anda untuk menentukan viral load - konsentrasi bahan genetik patogen dalam satu mililiter darah. Penelitian ini dilakukan sebelum dimulainya terapi, dan kemudian pada sesi pertama, keempat, kedua belas, dan (jika perawatannya panjang) dua puluh empat minggu untuk mengevaluasi keefektifannya.

  • Genotyping Agen penyebab hepatitis C sering dan cepat bermutasi. Ada tujuh varian genotipe virus yang ditemukan di planet ini. Di Rusia, jenis pertama, kedua dan ketiga adalah umum. Masing-masing genotipe memiliki ketahanan yang berbeda terhadap terapi, misalnya, efektivitas pengobatan jenis pertama adalah enam puluh persen, dan untuk yang kedua dan ketiga angka ini mencapai delapan puluh lima. Oleh karena itu, untuk memilih obat yang tepat dan meresepkan pengobatan jangka waktu yang cukup, perlu ditentukan dengan tepat jenis virus apa yang terinfeksi oleh pasien.
  • Indikasi untuk analisis PCR untuk hepatitis C

    Studi PCR diresepkan dalam kasus-kasus berikut:

    • kontak dengan orang yang sakit di mana infeksi bisa terjadi;
    • immunoassay enzim positif;
    • tanda-tanda sirosis: perubahan ukuran hati, pembesaran limpa, penampilan di perut pleksus vena subkutan;
    • munculnya gejala kerusakan hati: nyeri di perut kanan, menguningnya kulit;
    • peningkatan aktivitas ALT dan AST dalam analisis biokimia darah;
    • sebelum memulai pengobatan untuk menentukan viral load;
    • untuk memantau efektivitas terapi antiviral;
    • setelah perawatan untuk mengendalikan kekambuhan;
    • di hadapan didiagnosis hepatitis B, untuk mengecualikan kerusakan hati campuran.

    Penjelasan studi PCR tentang hepatitis C

    Decoding analisis PCR dan immunoassay enzim untuk hepatitis C harus dilakukan oleh spesialis penyakit hepatologi atau infeksi. Menganalisis hasil PCR diperlukan dalam kombinasi dengan data analisis biokimia darah, biopsi dan ultrasound. Hanya dokter yang memenuhi syarat yang akan dapat menganalisis hasil penelitian dan, berdasarkan mereka, meresepkan perawatan yang benar.

    Decoding analisis kualitatif.

    Dalam bahan biologis yang dianalisis ditemukan bahan genetik dari patogen. Infeksi dikonfirmasi.

    Infeksi tidak ada, atau jumlah RNA patogen di bawah batas sensitivitas.

    Decoding analisis kuantitatif.

    Tingkat normal untuk orang sehat. Ini berarti bahwa tidak ada RNA hepatitis C dalam materi yang diteliti, atau konsentrasinya di bawah ambang sensitivitas penelitian.

    Konsentrasi RNA berada di bawah kisaran kuantifikasi. Hasil ini diinterpretasikan dengan sangat hati-hati, menghubungkan mereka dengan data dari penelitian lain, sering kali dipelajari kembali.

    Tingkat viral load pada konsentrasi yang diberikan dianggap rendah. Biasanya, penurunan jumlah virus berarti bahwa terapi tersebut berhasil.

    Lebih dari 8 * 10 ^ 5 IU / ml

    Tingkat viral load pada konsentrasi yang diberikan dianggap tinggi.

    Lebih dari 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

    Jumlah RNA di atas batas atas rentang kuantifikasi. Tidak mungkin untuk menarik kesimpulan tentang tingkat viral load dengan hasil ini. Biasanya dalam kasus seperti itu, tes diulang dengan pengenceran sampel darah.

    Decoding genotyping.

    Terdeteksi RNA dari genotipe tertentu

    Virus Hepatitis C dari genotipe dan subtipe tertentu terdeteksi dalam biomaterial. Hasilnya dikodekan dalam angka Romawi dan huruf Latin, misalnya - 1a, 2b. Secara total ada tujuh genotipe dan enam puluh tujuh subtipe, namun, di Rusia hanya ada tiga jenis pertama.

    Hepatitis C virus RNA terdeteksi

    RNA ditemukan dalam darah genotipe langka untuk Rusia, yang tidak dapat dikaitkan dengan tipe pertama, kedua, atau ketiga. Lebih banyak penelitian diperlukan.

    Hasil ini menunjukkan bahwa pasien sehat, atau bahwa jumlah RNA patogen terlalu kecil.

    Ada kemungkinan bahwa analisis PCR untuk hepatitis C negatif, dan assay immunosorbent terkait enzim mengenali antibodi terhadap virus. Ini berarti bahwa pasien menderita hepatitis C akut dan sembuh sendiri. Sekitar dua puluh kasus infeksi menghasilkan pemulihan spontan jika tubuh pasien memiliki ketahanan yang cukup terhadap infeksi.

    Meskipun PCR adalah tes yang sangat akurat, hasilnya mungkin terdistorsi dalam situasi berikut:

    • darah diangkut ke laboratorium dalam kondisi yang tidak sesuai, suhu dilanggar;
    • sampel biomaterial terkontaminasi;
    • ada jejak sisa heparin dan antikoagulan lainnya di dalam darah;
    • Peneliti ditemukan sebagai inhibitor - zat yang memperlambat atau menghentikan reaksi berantai polymerase.

    Keunggulan PCR dibanding metode lainnya

    1. Diagnosa pada tahap awal. PCR mendeteksi materi genetik dari agen penyebab. Dengan menggunakan analisis imunofluoresensi, hanya imunoglobulin yang dapat ditentukan - zat yang diproduksi tubuh sebagai respons terhadap infeksi. Dalam kasus infeksi hepatitis C, interval antara infeksi dan permulaan respon imun mungkin beberapa minggu dan bulan, saat ini ELISA tidak akan efektif. PCR akan memberikan jawaban pada minggu pertama setelah infeksi.

  • Probabilitas kesalahan rendah. Dalam materi yang diteliti menentukan luas materi genetik, yang merupakan karakteristik dari hanya satu jenis patogen. Ini menghilangkan hasil yang salah. Ketika kesalahan ELISA dimungkinkan, karena jenis antibodi yang sama dapat dilepaskan terhadap virus yang berbeda - antibodi tersebut disebut antibodi silang.

  • Sensitivitas tinggi. PCR memungkinkan untuk mendeteksi RNA agen penyebab bahkan dalam jumlah minimal. Ini memungkinkan untuk mengidentifikasi infeksi yang tersembunyi.
  • Cara mempersiapkan donor darah untuk studi PCR

    Untuk analisis PCR hepatitis C, darah vena dikumpulkan. Biasanya, dua bagian darah diambil dari pembuluh darah pasien pada saat yang sama: yang pertama dikirim untuk PCR dan yang kedua oleh ELISA. Hal ini dilakukan untuk lebih akurat menilai berapa banyak pasien terinfeksi virus, dan bagaimana kekebalan melawannya.

    Biasanya pasien harus mematuhi aturan berikut:

    • tes darah diambil di pagi hari;
    • Interval antara makanan terakhir dan donor darah harus delapan hingga sepuluh jam;
    • dua atau tiga hari sebelum analisis, perlu untuk meninggalkan makanan yang digoreng dan berlemak, dan alkohol;
    • selama dua puluh empat jam sebelum analisis, pasien harus menghindari aktivitas fisik: jangan membawa beban, jangan pergi ke gym atau kolam renang.

    Artikel Sebelumnya

    Cara mengobati hepatitis B

    Artikel Berikutnya

    Tes hepatitis

    Artikel Terkait Hepatitis