Tes darah HCV: apa itu?

Share Tweet Pin it

Menurut konsep kedokteran modern, superioritas prevalensi di dunia adalah milik virus. Umat ​​manusia harus menggunakan banyak kekuatan dan sumber daya untuk memerangi mereka. Peran yang sangat penting adalah diagnosis lesi virus pada hati, khususnya hepatitis virus C. Penafsiran yang tepat dari parameter laboratorium untuk mendeteksi penyakit ini sulit karena banyaknya hasil tes darah positif palsu. Oleh karena itu, sangat penting pilihan dan interpretasi yang benar dari penelitian.

Metode pendeteksian virus

Virus hepatitis C (hcv) adalah untaian kecil RNA dalam selubung virus, yang menggunakan bahan genetik dari sel-sel hati untuk reproduksinya. Kontak langsung mengarah ke:

  • Awal proses peradangan di hati;
  • Penghancuran sel-sel hati (cytolysis);
  • Peluncuran mekanisme kekebalan dengan sintesis antibodi spesifik;
  • Agresi autoimun dari kompleks imun terhadap hepatosit yang meradang.

Virus hepatitis C, yang memasuki tubuh, menyebabkan respons kekebalan yang sangat lambat, yang meninggalkannya tanpa disadari untuk waktu yang lama. Penyakit ini sering dideteksi hanya pada tahap sirosis hati, meskipun sepanjang waktu partikel-partikel virus dan antibodi terkait mereka bersirkulasi dalam darah. Semua metode yang dikenal untuk mendiagnosis infeksi hcv didasarkan pada ini. Ini termasuk:

  1. Tes serologis di laboratorium;
  2. Diagnostik PCR (reaksi berantai polymerase);
  3. Tes cepat untuk menentukan penyakit di rumah.

Video tentang hepatitis C:

Indikasi yang mungkin untuk penelitian

Siapa pun dapat menguji infeksi hcv. Indikasi khusus untuk ini tidak perlu, kecuali keinginan seseorang untuk menjalani tes darah ini. Tetapi ada kategori orang yang tunduk pada penelitian wajib. Ini termasuk:

  • Donor darah;
  • Orang-orang yang menerima transfusi darah, komponen atau obatnya berdasarkan itu;
  • Peningkatan tingkat transaminase hati (AlAT, AsAT), terutama setelah intervensi bedah sebelumnya, persalinan dan prosedur medis lainnya;
  • Dugaan virus hepatitis C atau kebutuhan untuk mengecualikan diagnosis ini;
  • Tes negatif untuk virus hepatitis B di hadapan gejala radang hati;
  • Memonitor efektivitas terapi untuk infeksi hcv dan memutuskan pertanyaan mengenai taktik perawatan lebih lanjut.

Fitur diagnosis serologis dan penilaian hasil

Tes darah laboratorium untuk hcv melibatkan deteksi antibodi (imunoglobulin) kelas M dan G ke komponen antigenik dari virus hepatitis C. Untuk tujuan ini, tes immunosorbent enzyme-linked (ELISA) dan radioimmunoassay (RIA) digunakan. Metode laboratorium untuk mendeteksi antibodi dianggap yang paling dapat diandalkan karena memungkinkan penggunaan beberapa kompleks antigenik dari jenis virus hepatitis C yang paling umum sebagai reagen.

Untuk penelitian, sekitar 20 mililiter darah vena dikumpulkan dari vena perifer. Ini disentrifugasi dan dibela untuk mendapatkan plasma (bagian transparan cair). Elemen berbentuk dan endapan dihilangkan. Untuk menghindari positif palsu, lebih baik minum darah di pagi hari sebelum makan. Beberapa hari sebelum ini, disarankan untuk mengecualikan obat, terutama yang mempengaruhi keadaan sistem kekebalan tubuh.

Hasil tes dapat disajikan sebagai berikut:

  1. Hcv negatif. Ini berarti tidak ada antibodi terhadap virus hepatitis C yang terdeteksi di dalam tubuh. Tidak ada penyakit;
  2. Hcv positif. Hal ini menunjukkan adanya antibodi terhadap virus hepatitis C dalam sampel darah yang diteliti, orang tersebut pernah mengidap penyakit ini atau sedang menderita bentuk akut atau kronis;
  3. Anti-hcv IgG terdeteksi. Dalam hal ini, ada baiknya memikirkan tentang virus hepatitis C kronis;
  4. Anti-hcv IgM terdeteksi. Keberadaannya yang terisolasi menunjukkan proses akut, dan kombinasi dengan IgG anti-hcv menunjukkan eksaserbasi yang kronis.

Fitur pengujian cepat

Siapa pun dapat melakukan tes darah untuk hcv sendiri. Ini menjadi mungkin karena pembuatan sistem tes khusus untuk diagnosis cepat hepatitis virus C. Penampilan mereka lebih rendah daripada metode serologi laboratorium, tetapi sangat baik untuk perkiraan penentuan kemungkinan infeksi dalam waktu singkat.

Anda dapat membeli atau memesan sistem uji di apotek mana pun. Ini mencakup semua yang Anda butuhkan untuk ujian. Analisis dimulai dengan pembukaan wadah steril dan persiapan semua komponen. Setelah perawatan dengan serbet khusus dengan jari antiseptik, itu dengan lembut ditusuk dengan scarifier. Menggunakan pipet, 1-2 tetes darah dikumpulkan dan dipindahkan ke ceruk di atas pelat uji. Ke darah tambahkan 1-2 tetes reagen dari vial, yang merupakan bagian dari tes. Hasilnya harus dievaluasi setelah 10 menit. Sangat penting untuk tidak mengevaluasi hasil setelah 20 menit karena kemungkinan hasil positif palsu.

Tes darah dapat diartikan sebagai:

  1. Di jendela tablet muncul satu garis ungu (uji negatif). Ini berarti tidak ada antibodi untuk hcv yang ditemukan dalam darah yang diteliti. Manusia itu sehat;
  2. Di jendela tablet muncul dua garis ungu (uji positif). Hal ini menunjukkan adanya antibodi dalam darah tes dan asosiasi tubuh dengan hepatitis virus C. Orang-orang seperti itu tunduk pada metode diagnosis serologis yang lebih menyeluruh tanpa gagal;
  3. Tidak satu pun strip muncul di jendela tablet. Sistem tes dimanjakan. Pengujian ulang disarankan.

Fitur diagnostik PCR

Reaksi berantai polimerase adalah cara paling modern untuk mendeteksi materi genetik dari sel apa pun. Sehubungan dengan virus hepatitis C, metode ini memungkinkan untuk mendeteksi molekul RNA dari partikel virus. Ini dapat dilakukan dengan metode kualitatif dan kuantitatif. Metode pertama mungkin tidak informatif jika jumlah partikel virus dalam darah tes tidak mencapai nilai ambang. Metode kedua memungkinkan Anda untuk secara akurat menentukan jumlah rantai virus RNA yang terdeteksi dan lebih sensitif.

Analisis dapat diwakili oleh hasil berikut:

  1. Hcv RNA tidak terdeteksi. Ini berarti tidak ada partikel virus dalam darah yang sedang diuji;
  2. RNA hcv terdeteksi. Ini menunjukkan infeksi hepatitis C;
  3. Pemeriksaan PCV kuantitatif dilakukan untuk menilai tingkat infeksi darah pasien dan aktivitas virus di dalam tubuh. Viral load darah yang tinggi adalah 600 hingga 700 IU / ml. Indikator di atas angka ini disebut sangat tinggi, di bawahnya - viral load darah yang rendah.

Tes darah untuk hcv dalam diagnosis virus hepatitis C adalah satu-satunya metode yang informatif, dapat diakses dan tidak berbahaya untuk memverifikasi diagnosis. Interpretasi dan kombinasi yang benar dari berbagai cara pelaksanaannya meminimalkan jumlah kesalahan diagnostik.

BEST anti-HCV (set 2) 12x8

Cat. No. 0772

Harga: berdasarkan permintaan

Anda dapat menambahkan item ke keranjang dengan menentukan kuantitas

Jenis kemasan: kotak kardus

Kit reagen untuk deteksi imunoenzim imunoglobulin kelas G dan M untuk virus hepatitis C dalam serum manusia / plasma dan produk darah (imunoglobulin, interferon, kriopresipitat, albumin). Set 2 dirancang untuk 96 penentuan, termasuk kontrol - 4 lubang untuk setiap analisis, serta penggunaan fraksional satu strip per studi. Dirancang untuk pengaturan manual, dalam analisis jenis terbuka ELISA otomatis. Teknik ini didasarkan pada ELISA fase padat menggunakan antigen rekombinan. Perhitungan yang mungkin dari koefisien positivitas. Kesetaraan volumetrik dari kontrol dan sampel. Standarisasi kondisi reaksi enzimatik dengan chromogen dalam termostat pada 37 ° C. Waktu reaksi: 1 jam 20 menit

Tujuan fungsional

Direkomendasikan untuk pemeriksaan donor darah, organ, jaringan manusia, diagnosis banding hepatitis virus

Spesifikasi teknis

Paket termasuk:
1. Lipat tablet - 1 pc.
2. Kontrol positif dan negatif - 2x1 fl.
3. Konjugat dan solusi untuk pengencerannya (RK) - 2x1 fl.
4. Solusi untuk pengenceran serum (RS) - 1 fl.
5. Larutan buffer fosfat-garam, konsentrat (FSB) - 2 fl.
6. Substrate buffer solution (SBR) - 1 fl.
7. Tetramethylbenzidine concentrate (TMB) - 1 fl.
8. Hentikan reagen - 1 fl.
9. Instruksi penggunaan.
10. Film untuk menempel.
Sampel yang diteliti: serum atau plasma darah, dengan volume tidak lebih dari 40 μl.
Jumlah protokol untuk ELISA: minimal 4.
Kondisi penyimpanan: pada suhu +2. 8 ° C untuk seluruh umur simpan yang ditunjukkan pada label.
Umur simpan set adalah 12 bulan dari tanggal produksi.
Terdaftar di Roszdravnadzor

Tes darah HCV

Cara menyebarkan penyakit dapat dibagi menjadi beberapa kelompok:

  • Parenteral - artinya infeksi terjadi melalui berbagi alat-alat medis, jarum dan alat-alat manicure yang tidak steril;
  • Seksual - virus ditularkan dari satu pasangan ke pasangan lainnya selama hubungan seksual tanpa pelindung;
  • Jalur vertikal adalah infeksi janin dari ibu yang sakit.

Hepatitis harus diuji oleh orang yang:

  • Mempersiapkan rawat inap yang direncanakan;
  • Berencana untuk punya bayi;
  • Peningkatan bilirubin, ALT atau AST ditemukan dalam analisis klinis;
  • Memiliki gambaran gejala mirip dengan tanda-tanda hepatitis C;
  • Seringkali mengubah pasangan seksual atau lebih memilih seks tanpa kondom;
  • Kecanduan obat-obatan;
  • Berkumpul untuk menjadi donor;
  • Mereka yang bekerja di institusi medis atau prasekolah harus menjalani pemeriksaan lengkap setiap tahun, termasuk jenis analisis ini.

Tes darah HCV adalah metode laboratorium untuk diagnosis hepatitis C, mekanisme kerjanya didasarkan pada identifikasi antibodi seperti Ig G dan Ig M, yang mulai aktif berkembang ketika antibodi virus muncul dalam darah. Apa itu? Ini adalah mikroorganisme patogen yang muncul beberapa minggu atau bahkan beberapa bulan setelah infeksi seseorang.

Analisis dekode

Mempelajari struktur HCV, para ilmuwan telah menyimpulkan bahwa patogen ini adalah genom yang termasuk virus hewan dan tumbuhan. Ini terdiri dari satu gen, yang sesuai informasi tentang sembilan protein. Yang pertama dipercayakan dengan tugas menembus virus ke dalam sel, yang terakhir bertanggung jawab untuk pembentukan partikel virus, dan yang lain lagi beralih fungsi alami dari sel untuk diri mereka sendiri. Mereka termasuk kelompok struktural protein ketika enam lainnya non-struktural.

Genom HCV adalah untaian RNA tunggal yang terbungkus dalam kapsulnya sendiri (capsid) yang dibentuk oleh protein nukleokapsid. Semua ini diselimuti oleh cangkang yang terdiri dari protein dan lipid, memungkinkan virus untuk berhasil mengikat sel yang sehat.

Begitu virus memasuki aliran darah, ia mulai beredar ke seluruh tubuh melalui aliran darah. Setelah berada di hati, genom mengaktifkan fungsinya dan bergabung dengan sel-sel hati, secara bertahap menembus ke dalamnya. Hepatosit (disebut juga sel-sel ini) mengalami gangguan selama fungsinya. Tugas utama mereka adalah bekerja untuk virus, di mana mereka perlu mensintesis protein virus dan asam ribonukleat.

HCV membedakan beberapa genotipe, yaitu strain. Saat ini, 6 genotipe diketahui, dan masing-masing spesies ini memiliki subspesies sendiri. Semuanya ditunjuk tergantung pada penomoran dari 1 hingga 6. Ada informasi tentang lokalisasi virus di dunia. Sebagai contoh, 1, 2, dan 3 genotipe ditemukan di seluruh dunia, sementara 4 lebih umum di Timur Tengah dan Afrika, 5 di Afrika Selatan, dan 6 di Asia Tenggara.

Dasar untuk pengobatan harus tes darah positif untuk HCV, serta genotipe tertentu.

Decoding HCV analysis:

  • Anti-HCV Ig M - penanda replikasi aktif dari virus hepatitis C;
  • Anti-HCV Ig G - kemungkinan adanya virus hepatitis C;
  • Ag HCV adalah hasil positif yang menunjukkan keberadaan virus hepatitis C;
  • HCV RNA - virus hepatitis C hadir di dalam tubuh dan secara aktif mengalami kemajuan.

Hasil positif palsu

Bahkan lebih kecil kemungkinannya untuk berbicara tentang hasil negatif palsu, yang dicatat pada pasien yang memakai imunosupresan, atau ini dipengaruhi oleh karakteristik sistem kekebalan mereka. Hasil yang sama diharapkan jika hepatitis C dalam tahap awal perkembangannya.

Jika Anda memiliki kesalahpahaman, Anda dapat menggunakan tes PCR hepatitis C, jika hasilnya positif, kemudian ambil tes lain untuk menentukan genotipe virus.

Keabsahan dan cara lulus

Tes hepatitis C menyiratkan mengambil darah pasien dengan perut kosong, mengingat bahwa dia harus makan malam selambat-lambatnya 8 jam sebelum pengiriman bahan. Setelah bangun tidur, Anda hanya dapat minum sedikit air putih non-karbonasi. Akan lebih baik jika pada malam studi Anda memantau diet Anda, membuatnya semudah dan sesederhana mungkin. Makanan yang digoreng dan berlemak harus benar-benar dikecualikan, seperti halnya alkohol. Kerja fisik dan olahraga yang keras dapat mempengaruhi keakuratan hasil tes, jadi cobalah untuk menghindarinya.

Jika Anda akan menyumbangkan darah untuk analisis untuk mendeteksi hepatitis C, maka Anda harus diberitahu bahwa obat-obatan dapat mendistorsi nilai-nilai nyata, oleh karena itu, melakukan penelitian sebelum memulai pengobatan, atau setelah hanya beberapa minggu setelah pembatalan. Jika menghentikan pengobatan tidak dimungkinkan menurut kesaksian seorang dokter, maka beri tahu perawat yang sedang melakukan tes. Dia harus mencatat nama obat yang diambil dan dosis di mana Anda diresepkan.

Tes laboratorium membutuhkan serum. Berapa banyak material yang valid? Mereka dapat disimpan selama kurang dari lima hari pada suhu mulai dari 2 hingga 8 derajat Celsius, dan lebih dari lima hari, asalkan suhu penyimpanan -20 derajat Celcius.

Tes darah HCV adalah wajib untuk orang dengan imunodefisiensi, terutama dengan HIV.

Administrasi portal secara kategoris tidak merekomendasikan perawatan sendiri dan menyarankan untuk menemui dokter pada gejala pertama penyakit. Portal kami menyajikan spesialis medis terbaik kepada siapa Anda dapat mendaftar secara online atau melalui telepon. Anda dapat memilih dokter yang tepat sendiri atau kami akan mengambilnya untuk Anda benar-benar gratis. Juga, hanya ketika merekam melalui kami, harga konsultasi akan lebih rendah daripada di klinik itu sendiri. Ini adalah hadiah kecil kami untuk pengunjung kami. Memberkatimu!

Anti vgs terbaik

Enzim immunoassay kit untuk mendeteksi imunoglobulin kelas M ke virus hepatitis C.

Anti-HCV-auto terbaik (set 1)
(Untuk analisa otomatis)

Anti-HCV-auto terbaik (set 2 / Charoite)

Enzyme immunoassay kit untuk mendeteksi imunoglobulin kelas G dan M untuk virus hepatitis C untuk analisis ELISA otomatis.

Anti-HCV terbaik (Kit 1)

Anti-HCV terbaik (Kit 2)

Anti-HCV terbaik (Kit 3)

Anti-HCV terbaik (Kit 4)

Enzim immunoassay kit untuk mendeteksi imunoglobulin kelas G dan M untuk virus hepatitis C.

Enzyme immunoassay kit untuk mendeteksi imunoglobulin kelas G dan M untuk protein individu dari virus hepatitis C (inti, NS3, NS4, NS5).

Tes anti-HCV-konfirmasi terbaik

Enzim immunoassay kit untuk kehadiran imunoglobulin kelas G dan M untuk virus hepatitis C.

VGS AG / AT-IFA-BEST (set 1)

VGS AG / AT-IFA-BEST (set 2)

Enzim immunoassay kit untuk mendeteksi antibodi terhadap virus hepatitis C dan antigen inti HCV.

Kit reagen untuk deteksi imunoenzimme antigen inti dari virus hepatitis C.

Kit reagen untuk mengkonfirmasi keberadaan antibodi terhadap virus hepatitis C dengan metode imun blotting.

Atur untuk kontrol kualitas laboratorium ELISA "Serum yang mengandung antibodi terhadap virus hepatitis C".

Panel Kontrol Serum Anti-HCV

Satu set sampel serum darah, mengandung dan tidak mengandung antibodi untuk hepatitis C. Untuk pengendalian kualitas internal (penilaian kebenaran) studi anti-HCV.

Panel Serum Standar Anti-HCV

Satu set sampel serum darah, mengandung dan tidak mengandung antibodi untuk hepatitis C.

Anti vgs positif apa artinya

Hepatitis C antibodi dan apa yang harus Anda ketahui tentang mereka

Ketika berbagai partikel asing, seperti virus, masuk ke tubuh seseorang, sistem kekebalan manusia mulai menghasilkan zat seperti itu, yang disebut imunoglobulin. Ini adalah sel-sel khusus yang membantu tubuh mulai melawan virus. Mereka disebut antibodi terhadap hepatitis C. Apa yang harus saya ketahui tentang mereka?

Apa antibodi terhadap hepatitis C?

Antibodi tersebut dideteksi dengan metode khusus ELISA atau skrining, yang digunakan untuk menentukan apakah seseorang memiliki virus hepatitis C. Antibodi terhadap hepatitis C tersebut datang dalam 2 kelas:

- jadi antibodi ini untuk hepatitis C disebut dalam bahasa Latin. Pada saat yang sama, antibodi ini secara keseluruhan adalah antibodi terhadap hepatitis C.

Apa arti antibodi terhadap hepatitis C?

Benar-benar semua pasien diuji untuk keberadaan penanda tersebut untuk mengungkapkan apakah mereka memiliki virus hepatitis C. Jika penyakit sudah akut atau kronis, mereka memiliki antibodi Anti-HCV, antibodi ini untuk hepatitis C dapat dideteksi hanya setelah 4 atau 6 minggu onset.

Ada kasus ketika, di hadapan antibodi Anti-HCV, orang sembuh tanpa bantuan spesialis, tetapi pada mereka sendiri. Orang-orang ini dapat ditemukan pasar ini dalam 4 - 8 tahun setelah pemulihan mereka. Bahkan jika tes anti-HCV positif, ini masih belum cukup untuk menegakkan diagnosis dengan benar. Pada hepatitis kronis, antibodi semacam itu untuk hepatitis C secara konstan disekresikan, dan setelah hasil positif dari pengobatan, mereka dapat bertahan di dalam tubuh untuk waktu yang lama, tetapi titer mereka secara bertahap mulai menurun.

Hepatitis C antibodi dan apa yang harus saya ketahui tentang mereka?

Yang paling penting, Anda perlu tahu bahwa antibodi semacam itu tidak akan dapat melindungi terhadap perkembangan infeksi itu sendiri, dan juga tidak akan mampu memberikan kekebalan dari infeksi ulang.

Ada juga yang namanya Spectrum anti-HCV. Ini juga antibodi, apalagi, spesifik, mereka cocok untuk individu, baik protein struktural dan non-struktural dari virus ini. Definisi mereka penting untuk menilai seberapa tinggi viral load, aktivitas infeksi, risiko kronisitas, serta untuk membedakan antara hepatitis akut atau kronis dan seberapa banyak hati sudah terpengaruh.

Antibodi terhadap hepatitis C dari kelas IgM adalah antigen dari virus ini. Mereka dapat ditentukan setelah 6, dan dalam beberapa kasus bahkan 4 minggu segera setelah infeksi, dalam hal mana konsentrasi mereka dapat mencapai maksimum. Dan setelah proses ini selesai, level IgM akan mulai turun, tetapi ketika infeksinya diaktifkan kembali, levelnya akan meningkat lagi. Oleh karena itu, antibodi tersebut dianggap sebagai gejala langsung dari infeksi kronis atau akut dengan tanda reaktivasi.

HCV - tes darah - apakah itu?

Salah satu penyakit paling kompleks dan umum pada akhir abad terakhir adalah infeksi virus hepatitis C. Di negara maju, prevalensi penyakit mencapai 2%, sementara jumlah total pasien di seluruh dunia adalah 500 juta. Infeksi terdeteksi jauh lebih lambat dari pendahulunya: hepatitis A dan B - dan pada awalnya itu disebut "baik infeksi A atau B". Seiring dengan pertumbuhan kecanduan narkoba, jumlah orang yang terinfeksi bertambah setiap tahun. Alasannya semua adalah cara infeksi: dengan obat intravena.

Juga, virus ditularkan saat melahirkan dari ibu ke anak jika kerusakan kulit telah terjadi. Oleh karena itu, penting untuk mengetahui, tes darah HCV - apakah itu? Selama kehamilan, perlu untuk melewati setiap ibu masa depan. Penyakit ini adalah pemimpin di antara alasan yang mengharuskan transplantasi ke hati yang sakit.

Bagaimana hepatitis C berkembang?

Infeksi dengan virus hepatitis C terjadi sebagai berikut: darah orang yang sakit harus masuk ke darah orang yang sehat. Aliran darah pertama membawa partikel virus, dilarutkan dalam darah yang sehat, ke hati dan reproduksi dimulai segera. Dalam hal ini, hati manusia terpengaruh ganda: di satu sisi, sel-sel hati dirusak oleh aktivitas virus itu sendiri, di sisi lain - tubuh manusia mulai bertempur: ia mengirimkan reaksi kekebalan, yaitu sel-sel limfosit khusus yang akan dipanggil untuk menghancurkan sel-sel hati yang terinfeksi.

Virus mengenali sistem kekebalan tubuh sesuai dengan isi materi genetik asing. Siapa pun yang telah menemukan ini, serta beberapa pasien yang wajib, tahu apa arti tes darah HCV. Setiap orang, setidaknya sekali menghadapi masalah ini, akan mengatakan bahwa ini adalah indikator yang sangat penting baik pada tahap deteksi dan pada tahap perawatan.

Kapan HCV diuji?

Ketika seorang pasien memiliki keluhan hati, dokter biasanya meresepkan tes darah HBS dan HCV untuk pasien seperti itu. Untuk menentukan apakah penyakit ini disebabkan oleh keberadaan virus hepatitis C atau penyakit terkait lainnya dalam darah, itu adalah tes darah HCV yang diperlukan. Apa indikator ini?

Analisis ini mengungkapkan antibodi dalam darah manusia yang mungkin milik salah satu dari 2 kelas:

  • Antibodi ke HCV. Mereka adalah penanda utama. Kehadiran infeksi dalam tubuh dikonfirmasi oleh deteksi RNA HCV. Antibodi ini ditemukan pada tahap pemulihan dan mungkin juga terus berada di dalam darah selama 1-4 tahun. Indikator utama adanya hepatitis kronis adalah tingkat pertumbuhan anti-HCV.
  • Tingkat IgA, IgM, IgG dalam serum. Pertumbuhan penanda ini menunjukkan kerusakan hati ketika terkena alkohol, dengan sirosis biliar dan beberapa penyakit lainnya.

Apa yang dibicarakan oleh penanda itu?

Sejak saat antigen memasuki tubuh manusia pada 4-5 minggu, itu dapat dideteksi dengan tes darah HCV. Itu adalah virus hepatitis C yang tidak bisa dikatakan dengan akurat. Data ini diperlukan bagi dokter untuk membuat keputusan tentang kebutuhan untuk terapi antivirus pasien. Terutama jika kurang dari 750 salinan RNA per 1 ml darah terdeteksi dalam darah, ini menunjukkan serangan virus minimal.

Hepatitis C antibodi selalu milik salah satu dari dua kelas, G atau M, yang diperlukan untuk menambahkan tes darah ke HCV. Dekripsi menjelaskan parameter ini sebagai imunoglobulin kelas G (IgG) dan M (IgM). Hasil positif pada penanda pertama tidak menunjukkan diagnosis yang pasti. Imunoglobulin Kelas G mencapai kinerja maksimumnya pada 5-6 bulan dari saat infeksi di dalam tubuh dan tetap sama pada hepatitis kronis.

Immunoglobulin kelas M dapat ditentukan dalam 1-1,5 bulan setelah infeksi dan sangat cepat mencapai konsentrasi maksimum. Ada indikator lain - anti-NS3, yang, dengan kinerjanya yang tinggi, adalah prekursor yang jelas dari adanya proses akut dalam tubuh.

Bagaimana cara mendonorkan darah untuk analisis HCV?

Untuk menyumbangkan darah di laboratorium untuk menentukan keberadaan antibodi HCV, tidak ada instruksi khusus. Satu-satunya rekomendasi dari para dokter: pagar harus dibuat dengan perut kosong. Darah diambil dari pembuluh darah pasien yang sedang diuji menggunakan spuit sekali pakai.

Interpretasi indikator

Jadi, pasien yang diduga melakukan tes darah HCV. Apa kelebihan dan kekurangan ini sebagai hasilnya? Tabel berikut akan menjawab ini.

Jenis tes HCV

Ada tes kualitatif dan kuantitatif yang menentukan HCV (tes darah). Apa itu?

Tes kuantitatif diterapkan jika batas bawah mencapai 500 salinan RNA per ml atau 200 unit per ml. Tes-tes ini menentukan HCV-RNA. Pengukuran dilakukan dua kali, karena data sering berbeda. Dengan tes anti-HCV dan kuantitatif positif memberikan hasil positif pada sekitar 75% kasus. Selain itu, hasil ini dapat diperoleh pada hampir 95% kasus pada pasien dengan hepatitis C akut atau kronis. Tes tersebut digunakan dalam diagnosis infeksi akut, serta pada pasien dengan imunodefisiensi, yang tes antibodinya memberikan hasil negatif, tetapi ada kecurigaan infeksi HCV.

Tes kualitatif lebih sensitif, batas bawah adalah 100 salinan RNA per ml. Digunakan untuk menegakkan diagnosis infeksi HCV akut, membuat tes darah untuk HCV. Hasil positif dapat dideteksi sudah selama dua minggu pertama setelah infeksi. Uji kualitas berbeda karena tes juga dapat memberikan hasil positif palsu atau negatif palsu.

Tes darah HCV: apa artinya dan kapan diresepkan?

Tes darah untuk HCV adalah salah satu metode untuk mendiagnosis virus hepatitis C. Tes ini diresepkan untuk keberadaan gejala hepatitis C, peningkatan kadar transaminase hati, serta pemeriksaan orang yang berisiko terinfeksi hepatitis virus. Dalam kasus terakhir, bersama dengan tes darah untuk HCV, tes darah HBs Ag dilakukan.

HCV (virus hepatitis C virus hepatitis C) milik keluarga flaviviruses. Ini pertama kali ditemukan pada tahun 1988 oleh sekelompok peneliti dari perusahaan bioteknologi Amerika, Chiron. Genom HCV diwakili oleh molekul RNA, sehingga tingkat mutasi virus sangat tinggi. Pada orang dengan virus hepatitis C, partikel virus terdeteksi, genom yang berbeda satu sama lain dengan 1-2%. Fitur populasi virus ini memungkinkannya untuk berkembang biak dengan sukses meskipun ada reaksi protektif dari kekebalan manusia. Perbedaan genom virus dapat mempengaruhi jalannya infeksi dan hasil pengobatan.

Menurut Organisasi Kesehatan Dunia, hari ini, sekitar 150.000.000 orang terinfeksi dengan virus HCV, setiap tahun virus hepatitis C menyebabkan lebih dari 350.000 pasien meninggal.

Metode penularan hepatitis C

Virus hepatitis C ditularkan dari darah yang terinfeksi, misalnya, ke penerima dari donor darah atau organ, ke bayi dari ibu yang terinfeksi, selama hubungan seksual, menggunakan jarum suntik non-steril di fasilitas medis dan instrumen untuk tato dan menusuk di salon.

Penyakit ini dapat terjadi dalam bentuk akut yang berlangsung selama beberapa minggu dan dalam bentuk kronis, yang dapat menyebabkan kanker atau sirosis hati.

Tes darah HCV: apa artinya dalam hal imunologi?

Tes darah untuk HCV didasarkan pada deteksi imunoglobulin spesifik dari kelas IgG dan IgM, oleh karena itu jenis penelitian ini kadang-kadang disebut tes darah anti-HCV. Imunoglobulin adalah protein spesifik dari sistem kekebalan tubuh, mereka diproduksi oleh B-limfosit sebagai respons terhadap deteksi protein asing dalam tubuh. Ketika terinfeksi dengan virus hepatitis C, imunoglobulin diproduksi untuk protein envelope virus, protein inti nukleokapsid, dan protein NS non-struktural. Munculnya antibodi pertama terhadap virus terjadi tidak lebih awal dari 1-3 bulan setelah infeksi. Dokter dapat menentukan fase infeksi (akut, laten atau reaktivasi) menggunakan antibodi yang terdeteksi. Antibodi spesifik untuk hepatitis C dapat dideteksi bahkan setelah 10 tahun setelah penyakit, tetapi konsentrasinya rendah dan mereka tidak mampu melindungi terhadap infeksi ulang virus.

Interpretasi hasil analisis

  • Tes darah HCV positif. Apa artinya ini? Hasil ini menunjukkan penyakit hepatitis C dalam bentuk akut atau kronis atau penyakit yang ditransfer sebelumnya.
  • Tes darah HCV negatif. Apa artinya ini? Tidak ada virus hepatitis C dalam darah atau infeksi yang terjadi baru-baru ini, sehingga belum ada antibodi. Pada beberapa pasien, antibodi terhadap virus ini tidak diproduksi sama sekali. Skenario penyakit ini disebut seronegatif, terjadi pada 5% kasus.
  • PCR untuk HCV RNA tidak menunjukkan virus, tes darah HCV positif sebelumnya diperoleh. Apa artinya ini? Hasil tes darah untuk HCV adalah positif palsu, alasannya adalah beberapa infeksi, neoplasma, penyakit autoimun.

Antibodi HCV terdeteksi dalam darah, apa artinya?

Natalka

Antibodi terhadap virus hepatitis C (anti-HCV) adalah metode untuk mendiagnosis infeksi hepatitis C dengan mendeteksi di dalam darah antibodi IgG dan IgM (total antibodi spesifik yang diproduksi untuk protein virus hepatitis C oleh ELISA). Biasanya, antibodi terhadap virus hepatitis C tidak ada dalam darah.
Deteksi antibodi total (anti-HCV) memungkinkan diagnosis hepatitis C mulai 3-6 minggu atau lebih setelah infeksi. Namun, deteksi antibodi oleh ELISA adalah skrining dan tidak cukup untuk membuat diagnosis virus hepatitis C dan memerlukan konfirmasi dengan metode imunoblot.

Julia

Tidak seperti HBV, dalam diagnosis penanda antigenik dan antibodi yang diperhitungkan, dengan HCV, hanya antibodi yang dideteksi oleh ELISA. Antigen HCV, jika mereka memasuki darah, dalam jumlah yang hampir tidak terperangkap. Antigen HCV dapat dideteksi pada spesimen biopsi hati menggunakan metode imunohistokimia. Ini secara signifikan membatasi kemampuan untuk menilai kursus dan kegiatan proses infeksi.
Baru-baru ini, indikasi telah muncul tentang pengembangan pendekatan baru untuk indikasi antigen HCV dalam darah. Langkah pertama adalah pelepasan antigen dari struktur sel oleh serum lisis, yang kedua adalah menjebak antigen dengan antibodi monoklonal spesifik. Pengenalan metode ini ke dalam praktik klinis dimaksudkan untuk secara signifikan memperkaya kemungkinan mendiagnosis dan memantau jalannya HCV.
Sebagian besar anti-HCV (dengan pengecualian antibodi untuk kelas M coreAg) tidak menunjukkan replikasi virus yang berkelanjutan, tidak mencirikan aktivitasnya, dan mungkin sesuai dengan pasca-infeksi. Perlu juga mempertimbangkan bahwa pada penerima yang ditransfusikan dengan darah yang terinfeksi, donor anti-HCV dapat dideteksi, dengan indikasi tunggal yang tidak selalu menunjukkan infeksi HCV pasca transfusi. Indikasi anti-HCV terutama memecahkan masalah diagnosis etiologi, tetapi tidak mencirikan jalannya infeksi (akut, kronis) dan tidak memecahkan masalah prognosis. Pada pasien dengan HCV kronis, anti-HCV ditemukan dalam darah tidak hanya dalam bentuk bebas, tetapi juga dalam komposisi kompleks imun yang beredar. Kandungan mereka relatif lebih besar dengan pengembangan hepatitis campuran HBV / HCV.
Antibodi diproduksi untuk masing-masing protein virus yang terletak di kawasan struktural dan non-struktural HCV. Ini menentukan kekhususan yang tidak setara dan, karenanya, konten informasi diagnostik yang berbeda dari tampilan. Untuk indikasi skrining anti-HCV, metode ELISA digunakan, dan metode imunoblot (RIBA) digunakan sebagai tes referensi konfirmasi. Sistem tes pertama berdasarkan indikasi antibodi terhadap C-100-3 dalam ELISA dengan cepat menjadi umum di klinik, praktik epidemiologi, dalam pemilihan donor. Namun, itu memungkinkan untuk menangkap antibodi di zona yang hanya mencirikan 12% dari polyprotein virus, dan hanya di wilayah nonstruktural (NS3, NS4). Selain itu, antigen rekombinan buatan C-100-3 tidak sepenuhnya bertepatan dengan protein virus alami, yang mentakdirkan imunogenisitasnya yang lemah.
Antibodi terhadap C-protein (inti Ag) dengan bantuan antigen C-100-3 tidak terperangkap sama sekali. Semua ini telah ditentukan kekhususan rendah dari indikasi anti-HCV dan sejumlah besar hasil negatif palsu, terutama pada fase HCV kronis. Pada pasien dengan hipergammaglobulinemia berat, sebaliknya, tes C-100-3 sering memberikan hasil positif palsu. Ketika menampilkan antibodi terhadap C-100-3, kesulitan tertentu muncul ketika memecahkan masalah diagnosis banding HCV kronis dengan hepatitis autoimun, cryoglobulinemia, dan penyakit kolagen.
Sistem uji generasi ke-2 memungkinkan untuk menangkap antibodi terhadap protein di berbagai area genom, tidak hanya non-struktural, tetapi juga wilayah struktural. Keuntungan mereka terutama adalah kekhususan yang tinggi, serta kemungkinan representasi yang lebih lengkap dari spektrum antigenik HCV. Penggunaan sistem uji dari generasi ke-2 memungkinkan untuk secara signifikan meningkatkan pemilihan donor dan mengurangi ancaman pengembangan HCV pasca-transduksi.
Namun, ketika menggunakan sistem uji generasi ke-2, hasil negatif palsu tidak dikecualikan, khususnya, pada pasien dengan genotipe HCV yang tidak biasa untuk wilayah ini. Sistem uji paling canggih dari generasi ke-3.
Informativeness penelitian secara signifikan ditingkatkan dengan penilaian komprehensif dari berbagai anti-HCV, tentu di bawah kontrol dinamis. Sistem pengawasan ini memungkinkan Anda untuk menangkap perubahan dalam rasio antibodi terhadap antigen HCV yang berbeda.

Evgeny Stefantsov

Putranya menemukan ATk HCVAg. Dan HB s Ag tidak terdeteksi, bisa ada kesalahan. Dan apa yang lebih baik untuk lulus analisis untuk diagnosis yang akurat? Anak laki-laki berusia 27 tahun tidak pernah menggunakan narkoba. Darah disumbangkan 2 kali di kota Tambov untuk HIV dan di sungai. P. Inzhavino pada pemeriksaan medis di tentara, dan kemudian menempatkan diagnosis semacam itu.

Hepatitis Anti HCV-total (positif) Berikan saran!

Saya dan istri saya diperiksa, tes menunjukkan virus hepatitis. Saya memiliki Anti HCV-total positif. Sisanya otr. Istriku juga. Seberapa berbahayanya berapa banyak waktu untuk menyembuhkan? Berapa biayanya? Dan bagaimana dengan pekerjaan, apakah mungkin untuk bekerja selama masa pengobatan? Merasa hebat!

P ke

Anti-HCV hadir di kedua akut (mereka dapat dideteksi sudah dari 4-6 minggu setelah infeksi) dan pada hepatitis kronis. Total anti-HCV juga ditemukan pada mereka yang pernah menderita hepatitis C dan sembuh sendiri. Tanda ini dapat ditemukan pada orang-orang seperti itu selama 4-8 tahun atau lebih setelah pemulihan. Oleh karena itu, tes anti-HCV positif tidak cukup untuk menegakkan diagnosis. Terhadap latar belakang infeksi kronis, antibodi total dideteksi secara konstan, dan setelah pengobatan yang berhasil, antibodi tersebut bertahan untuk waktu yang lama (terutama karena IgG inti anti-HCV, mereka ditulis di bawah), sementara titer mereka secara bertahap menurun.

Catherine Gustova

Hepatitis C ditularkan melalui darah dan cairan tubuh melalui rute parenteral, seksual dan transplasental. Kelompok berisiko tinggi adalah individu yang mempraktekkan penyalahgunaan obat intravena, seks bebas, serta profesional medis, pasien yang membutuhkan hemodialisis atau transfusi darah, tahanan. Menembus ke dalam tubuh, HCV memasuki makrofag darah dan hepatosit hati, di mana ia bereplikasi. Kerusakan pada hati terjadi terutama karena lisis kekebalan, dan virus juga memiliki efek sitopatik langsung. Kesamaan antigen virus dengan antigen sistem histocompatibility manusia menyebabkan terjadinya reaksi autoimun ("sistemik"). Program manifestasi sistemik dari infeksi HCV dapat menyebabkan tiroiditis autoimun, sindrom Sjogren, purpura thrombocytopenic idiopatik, glomerulonefritis, rheumatoid arthritis, dll. Dibandingkan dengan hepatitis virus lainnya, hepatitis C memiliki gambaran klinis yang kurang jelas, sering menjadi kronis. Dalam 20-50% kasus, hepatitis C kronis mengarah pada pengembangan sirosis hati dan pada 1,25 - 2,50% - untuk pengembangan karsinoma hepatoseluler. Komplikasi autoimun terjadi dengan frekuensi tinggi.
Aku ingin membuatmu kesal! Hepatitis C tidak dapat disembuhkan seperti infeksi HIV! Anda bisa hidup bersamanya selama bertahun-tahun! Tapi sirosis dapat terjadi cepat atau lambat. Itu tergantung pada siapa Anda bekerja. Apakah diagnosis Anda akan mempengaruhi pekerjaan Anda tidak diketahui. tetapi rekan Anda lebih baik tidak berbicara tentang diagnosis ini.

Kostarev konstantin

Perlu dicatat bahwa hanya sekitar 20% orang pernah terinfeksi hepatitis C, mengatasi infeksi itu sendiri. Oleh karena itu, sayangnya, dalam banyak kasus, kehadiran antibodi terhadap HCV menunjukkan virus hepatitis C kronis (CVHC).

Olga

Untuk semua hal di atas, tambahkan bahwa setelah deteksi antibodi, perlu untuk lulus analisis untuk keberadaan virus dalam darah. Analisis ini disebut RNA HCV oleh PCR, jika positif, maka perlu dilakukan genotip, yaitu mengidentifikasi genotipe virus (waktu dan biaya pengobatan bergantung padanya). Jika negatif, maka mungkin Anda telah menjadi salah satu dari 15-20% dari orang-orang yang beruntung yang memiliki penyembuhan diri. Tetapi dalam hal ini, Anda perlu mengendalikan situasi dan setidaknya sekali setahun Anda perlu mengambil analisis dengan PCR.
Jika Anda masih menderita hepatitis, maka Anda tidak boleh kesal. Ia berhasil diobati. Perawatannya sulit, tetapi dimungkinkan untuk bekerja jika pekerjaan tidak termasuk yang berbahaya yang memerlukan konsentrasi perhatian khusus. Anda tidak harus terbang ke angkasa tepat)))

Perangkat immunoassay enzim untuk mendeteksi imunoglobulin kelas G dan M untuk protein individual dari virus hepatitis C (inti, NS3, NS4, NS5) (Spektrum anti-HCV terbaik)

Kondisi penyimpanan Kit reagen untuk deteksi imunoenzim imunoglobulin kelas G dan M untuk protein individual dari virus hepatitis C (inti, NS3, NS4, NS5) (Anti-HCV-spectrum terbaik)

Jauhkan dari jangkauan anak-anak.

Memesan produk medis di apotek:

Tinggalkan komentar Anda

  • Kit pertolongan pertama
  • Toko online
  • Tentang perusahaan
  • Hubungi Kami
  • Kontak penerbit:
  • +7 (495) 258-97-03
  • +7 (495) 258-97-06
  • E-mail: [email protected]
  • Alamat: Rusia, 123007, Moskow, st. 5 Mainline, 12.

Kami berada di jejaring sosial:

© 2000-2018. PENDAFTARAN MEDIA RUSIA® RLS ®

Hak cipta dilindungi.

Penggunaan bahan komersial tidak diizinkan.

Informasi yang ditujukan untuk para profesional perawatan kesehatan.

Diagnosis laboratorium hepatitis C

MI Mikhailov, Institut Epidemiologi dan Mikrobiologi. N.F. Gamalei RAMS, Moskow

Ketika membuat diagnosis "hepatitis C", faktor-faktor terpenting berikut harus dipertimbangkan:

  • indikator aktivitas enzim "hati";
  • ada atau tidak adanya tanda-tanda infeksi dengan virus hepatitis C (HCV) dan virus hepatotropik lainnya;
  • data sejarah epidemiologi;
  • hasil pemeriksaan klinis pasien. Hanya akuntansi komprehensif faktor-faktor ini memungkinkan untuk mendiagnosis penyakit ini dengan tingkat keandalan yang tinggi. Pekerja laboratorium harus memberikan informasi yang obyektif tentang spektrum antigen dan antibodi virus yang teridentifikasi, serta RNA HCV, yang memungkinkan dokter, petugas layanan transfusi darah, dan ahli epidemiologi untuk memecahkan masalah mereka. Paling sering itu adalah:
  • identifikasi orang dengan HCV untuk mengurangi tingkat hepatitis C pasca transfusi;
  • diagnosis dan perbedaan antara hepatitis C akut dan kronis;
  • prognosis penyakit;
  • pengangkatan, evaluasi dan prognosis efektivitas terapi;
  • studi tentang luasnya penyebaran HCV dalam populasi dan berbagai kelompok populasi.
    Dalam hal ini, bidang utama pekerjaan yang dilakukan oleh staf laboratorium adalah:
  • pengembangan dan pemilihan metode yang paling informatif untuk mengidentifikasi penanda infeksi HCV;
  • penentuan kriteria untuk penilaian obyektif dari hasil yang diperoleh;
  • pengembangan algoritma penelitian laboratorium yang optimal;
  • implementasi sistem untuk meningkatkan kualitas pendeteksian penanda infeksi HCV.

    Dasar diagnosis laboratorium hepatitis C adalah pengetahuan tentang HCV, replikasinya, informasi tentang dinamika kemunculan dan hilangnya penanda infeksi, serta metode imunokimia dan biologi molekuler modern untuk mendeteksi antigen, antibodi dan asam nukleat.

    Virus hepatitis C. HCV pertama kali diidentifikasi pada tahun 1988, ketika sekelompok peneliti yang dipimpin oleh M. Houghton dan Choo Q.L menerapkan metode penelitian molekuler-biologis baru, mengkloning dan mengurutkan genom virus [I]. Partikel virus hepatitis C memiliki bentuk bulat dengan diameter rata-rata sekitar 50 nm [2,3]. Upaya untuk mendeteksi dan mempelajari secara visual struktur virus hepatitis C telah dibuat sejak ditemukannya virus, tetapi masih belum ada hasil penelitian yang terdokumentasi dengan baik, yang mungkin disebabkan oleh sulitnya mengumpulkan partikel virus dalam jumlah yang diperlukan.

    VGS adalah satu-satunya anggota genus Hepacivirus dalam keluarga Flaviviridae, yang termasuk virus seperti virus diare dan demam babi (genus Pestivirus) dan virus demam kuning, virus Denge dan virus GB: GBV-A, GBV-B dan GBV-C / HGV (genus Flavivi-rus). Struktur virus hepatitis C dapat direpresentasikan sebagai berikut (Skema No. 1). Nukleokapsid mengandung RNA dari virus hepatitis C. Dari atas, nukleokapsid dilapisi dengan membran lipid yang diselimuti oleh protein yang dikodekan oleh HCV RNA. Genom virus diwakili oleh molekul RNA linear tunggal berantai dari polaritas positif, dengan panjang sekitar 9.600 nukleotida. Organisasi genom HCV mirip dengan flavivirus lainnya. Ini membedakan dua zona yang mengkode protein struktural dan non-struktural (fungsional). Gen yang mengkode protein struktural terletak di wilayah 5 'genom virus, dan non-struktural di 3' wilayah. Gen HCV memiliki satu open reading frame (ORS), satu polipeptida (sekitar 3000 asam amino), yang dipotong menjadi protein struktural dan non-struktural oleh protease virus dan seluler.

    Fig. 1. Unsur-unsur struktural HCV

    Protein struktural termasuk protein yang dikodekan oleh zona Core, El, dan E2 dari RNA HCV. Tiga bentuk HCV C-protein terdeteksi: panjang penuh (p21) dengan berat molekul 21 kD, terpotong (p19) dan bentuk (p16) yang ditemukan di nukleolus dari hepatosit yang terinfeksi. Pada permukaannya, C-protein membawa berbagai epitop B-cell yang sangat lestari, yang keberadaannya sangat penting untuk mendeteksi antibodi terhadap HCV dalam proses diagnosis laboratorium hepatitis C.

    Zona RNA HCV protein E1 dan E2 menyandikan dengan berat molekul 31 dan 70 kD. Protein-protein ini memiliki beberapa situs N-glycosylation; dalam protein E1, hingga 6 situs tersebut didefinisikan, dan pada E2 - 11. Di bagian E2 ada informasi tentang protein kecil - p7, yang tidak ditemukan dalam struktur virus.

    Penentuan daerah yang terletak lebih dekat dengan ujung RNA HCV 3'-sebagai zona yang membawa informasi tentang protein non-struktural dari virus, menunjukkan bahwa protein ini bukan komponen struktural dari partikel virus. Di zona nonstruktural RNA HCV, ada bagian yang ditetapkan sebagai: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A dan NS5B. Sebagian besar protein yang dikodekan oleh zona non-struktural RNA HCV diperlukan untuk replikasi virus.

    Analisis komparatif dari sekuens nukleotida RNA dari isolat HCV yang diperoleh di berbagai daerah di dunia dan bahkan dalam perjalanan penyakit dari pasien yang sama mengungkapkan fitur utama dari virus ini - heterogenitas RNA yang tinggi. Posisi keragaman genetik yang signifikan dari RNA HCV membentuk dasar dari teori yang menjelaskan: pengangkutan virus jangka panjang (kadang seumur hidup), perkembangan yang sering dari penyakit kronis, kesulitan dalam terapi dan penciptaan vaksin yang efektif. Perbedaan paling signifikan dalam rangkaian RNA HCV terkonsentrasi di bagian N-terminal dari wilayah E2, yang ditetapkan sebagai "wilayah hypervariable" (HVR) [4].

    Saat ini, 6 genotipe utama dan lebih dari 100 subtipe HCV telah diidentifikasi. Genotipe 1a, 1b, 2a, 2b, 2c dan Za merupakan lebih dari 90% dari isolat HCV yang diperoleh di Amerika Utara dan Selatan, Eropa, Rusia, Cina, Jepang dan Australia / Selandia Baru [5]. Genotipe 4, 5a dan 6, masing-masing, dicatat di Afrika Tengah dan Selatan, dan Asia Tenggara. Di Rusia dan negara-negara CIS, dominasi genotipe 16 terdaftar (tidak kurang dari 68,9%) [6,7]. Dipercaya bahwa pasien yang terinfeksi genotipe 1 (terutama 1c) berespons lebih buruk terhadap pengobatan dibandingkan pasien yang terinfeksi dengan genotipe lain dari virus.

    Pada pasien, HCV bersirkulasi sebagai populasi partikel virus di mana genom berbeda satu sama lain oleh 1-2% (quasi-spesifisitas) sebagai akibat mutasi yang menumpuk selama infeksi dan / atau memasuki tubuh pasien selama infeksi. Bentuk mutan ini dapat berkontribusi pada replikasi yang lebih aktif atau dapat membantu virus menghindari respons imun tubuh dan berpotensi memengaruhi hasil infeksi akut, perbedaan dalam perjalanan penyakit dan respons terhadap terapi interferon [8].

    DEFINISI ANTI-HCV. Setelah penemuan virus HCV dan menentukan perannya dalam pengembangan hepatitis pasca-transfusi - “baik A maupun B”, para peneliti ditugasi dengan mengembangkan metode yang mampu mendeteksi orang dengan HCV dan cocok untuk mendiagnosis hepatitis C akut dan kronis. Ditemukan bahwa antigen HCV bersirkulasi di konsentrasi yang sangat rendah, dan jelas bahwa tingkat metodologis akhir 80-an abad ke-20, digunakan untuk mendeteksi antigen virus, jelas tidak cukup.

    Pada tahun 1989, sekelompok peneliti dari Chiron Corporation, di bawah arahan Q-L.Choo, mengkloning RNA HCV dan memperoleh oligopeptida imunoreaktif yang bereaksi dengan antibodi yang bersirkulasi dalam darah pasien dengan Hepatitis kronis “baik A maupun B”. Oligopeptida ini telah menjadi dasar obat diagnostik untuk mendeteksi antibodi terhadap HCV. Ini menentukan kemajuan pesat dalam pengembangan dan produksi komersial produk diagnostik. Metode utama yang digunakan untuk mendeteksi anti-HCV, telah menjadi enzyme-linked immunosorbent assay, sebagai metode yang memenuhi persyaratan perawatan kesehatan praktis - yaitu. Ini memiliki sensitivitas, spesifisitas dan kemudahan implementasi yang tinggi.

    Mengingat bahwa HCV menetap dalam darah pasien dengan hepatitis C akut dan kronis bersamaan dengan anti-HCV, perhatian pengembang obat diagnostik difokuskan pada pengembangan sistem uji untuk mendeteksi antibodi yang memberikan deteksi paling lengkap dari pembawa virus dan diagnosis infeksi akut yang paling dini. Berbagai antigen dan determinan antigenik yang dikodekan oleh zona struktural dan non-struktural RNA HCV telah menentukan arah dalam perancangan produk diagnostik dengan memilih dan mengatur oligopeptida yang digunakan untuk membuatnya. Selama waktu yang telah berlalu sejak penemuan HCV, sistem diagnostik dari tiga generasi telah dibuat (Tabel 1).

    Tabel 1
    Persiapan diagnostik untuk mendeteksi anti-HCV [9]

    Peptida yang digunakan
    zona RNA HCV di mana
    mereka dikodekan

    % deteksi operator
    HCV

    Pertama kali
    identifikasi
    anti-HCV dari
    mulailah sakit kuning

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 dan NS4
    SZZs NS3
    Dari 100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 dan NS4
    SZZs NS3
    Peptida NS5

    Pengenalan peptida tambahan, terutama c22-3 (Core), ke dalam persiapan diagnostik dari generasi ke-2 dan ke-3 diperbolehkan untuk memecahkan masalah utama, yaitu, untuk meningkatkan sensitivitas, spesifisitas dan, yang paling penting, kemampuan mendeteksi anti-HCV. Berkat diagnostik generasi ke-3, hingga 97% pembawa HCV dapat dideteksi. Pada saat yang sama, diskusi tertentu disebabkan oleh keputusan untuk memperkenalkan ke dalam peptida diagnostik yang dikode oleh wilayah NS5 dari RNA HCV. Menurut beberapa peneliti, kehadiran peptida ini tidak penting untuk meningkatkan kualitas obat diagnostik. [10,11]. Namun, antibodi untuk NS5 dapat dideteksi pada awal infeksi, yang meningkatkan kualitas diagnosis laboratorium dari hepatitis C akut [12].

    Saat ini di seluruh dunia, termasuk Rusia, produk diagnostik generasi ketiga digunakan. Peptida yang digunakan dalam persiapan diagnostik diperoleh dengan menggunakan teknologi rekombinan (misalnya, tes diagnostik perusahaan: Persiapan diagnostik, Nizhny Novgorod; Vektor, Novosibirsk; Roche; Abbott, dll.), Atau sintetik ( 000 MTS "Avicenna", St. Petersburg, "Organon", dll.). Diagnostik, di mana kedua jenis peptida secara bersamaan digunakan, ditetapkan sebagai obat generasi ke-4. Menurut karakteristik mereka, obat-obatan ini tidak memiliki perbedaan yang signifikan. Uji komparatif yang dilakukan secara teratur oleh Kementerian Kesehatan Rusia menunjukkan sensitivitas yang sebanding dari produk diagnostik produsen domestik dan asing.

    Telah ditetapkan bahwa penggunaan diagnostik generasi ke-3 untuk mendeteksi anti-HCV di antara populasi imunokompeten (misalnya, donor darah) diperkirakan mencapai 98,8-100%. Pada saat yang sama, di antara individu yang terganggu sistem kekebalan, seperti pasien setelah transplantasi ginjal, sumsum tulang atau orang yang terinfeksi HIV, angka ini secara signifikan lebih rendah - 50 - 95% [12]. S.George dkk. [13] menunjukkan bahwa pada 8,4% pasien dengan infeksi HIV, hasil negatif palsu deteksi anti-HCV dicatat. Selain itu, pada pasien seperti itu efek seroreversi dapat didaftarkan selama observasi, yaitu. pendaftaran hasil positif setelah periode anti-HCV seronegatif [14].

    Salah satu masalah paling penting ketika melakukan penelitian untuk kehadiran anti-HCV adalah hasil positif palsu. Penampilan mereka mungkin disebabkan oleh interaksi komponen reaksi yang tidak spesifik, kemungkinan reaksi silang dengan antigen virus lainnya, dan banyak faktor lainnya. Tingkat hasil positif palsu dalam deteksi anti-HCV dengan berbagai obat diagnostik dapat mencapai 10-20% [15,16]. Peningkatan tingkat hasil tersebut diamati di antara pasien dengan penyakit onkologi dan autoimun, orang dengan keadaan immunodeficiency dan pasien dengan sifilis [16,17]. Keberadaan hasil positif palsu menghadapkan pekerja laboratorium dengan tugas membedakan mereka dari deteksi anti-HCV yang sebenarnya. Untuk mengatasi masalah ini adalah deteksi serum HCV RNA dalam sampel darah. Namun, hasil negatif dari deteksi RNA HCV tidak menunjukkan adanya deteksi positif palsu anti-HCV. Harus diingat bahwa anti-HCV dapat beredar secara terpisah di dalam darah pasien yang telah sembuh dari hepatitis C akut (10-15%) atau yang telah menghilangkan RNA HCV sebagai hasil dari terapi.

    TES KONFIRMASI (TAMBAHAN). Tes tambahan (tambahan) telah dikembangkan untuk membedakan antara sampel positif palsu dan sampel yang sebenarnya mengandung antibodi terhadap HCV. Paling sering dalam tes ini prinsip immunoblot digunakan [misalnya, tes RIBA ("Ortho-Clinical Diagnostics"); "LiaTek HCV" (Organon Teknika)] ​​ketika antigen yang dikodekan oleh berbagai zona RNA HCV teradsorpsi pada membran nitroselulosa pada membran nitroselulosa. Anti-HCV berinteraksi dengan antigen teradsorpsi menggunakan antibodi berlabel enzim terhadap IgG manusia dan deteksi selanjutnya menggunakan kompleks substrat. Selain imunoblot, persiapan diagnostik untuk mendeteksi anti-HCV terhadap antigen spesifik yang dikodekan oleh berbagai zona RNA HCV juga digunakan sebagai tes tambahan ["Spectrum 4" (Imbio, Nizhny Novgorod; RecombiBest ANTI-HCV-SPECTR) - Vektor Terbaik ", Novosibirsk; ELISA- Anti-NSU-Spectr, NPO" Sistem Diagnostik ", Nizhny Novgorod].

    Pengembangan dan pelaksanaan tes ini sejalan dengan pengenalan tes skrining untuk mendeteksi anti-HCV, mengulangi prinsip perluasan spektrum peptida yang digunakan dalam setiap generasi produk diagnostik berikutnya. Dengan demikian, diagnosticum RIBA-III berbeda dari generasi sebelumnya dengan penambahan peptida yang dikodekan oleh zona NS5. Prinsip untuk mengkonfirmasi deteksi positif anti-HCV, terutama meliputi: kemungkinan (dalam beberapa kasus) untuk mendapatkan hasil reaksi enzimatik yang lebih akurat ketika berinteraksi dengan peptida individu, serta menggunakan spektrum peptida yang diperluas dalam diagnostik yang tidak digunakan dalam tes skrining. Hanya pengenalan peptida baru yang dapat meningkatkan nilai diagnostik tes konfirmasi.

    Interpretasi hasil yang diperoleh, misalnya, dalam tes seperti RIBA-III, termasuk tiga kemungkinan jawaban: positif, negatif, dan hasil yang tidak pasti. Yang terakhir dari mereka dikeluarkan dalam kasus tidak adanya indikasi yang jelas (sesuai dengan petunjuk yang melekat pada kit diagnostik), memungkinkan Anda untuk pasti menilai ada tidaknya anti-HCV dalam sampel yang diteliti. Rasio spektrum respon yang tercatat ketika melakukan tes konfirmasi bervariasi tergantung pada karakteristik kelompok pasien yang anti-HCV terutama terdeteksi [18]. Menurut J.M. Pawlotsky dkk. [19], dalam setengah dari hasil yang diperlakukan sebagai "tidak spesifik", adalah mungkin untuk mendeteksi RNA HCV. Menurut pendapat kami, legitimasi tanggapan - “hasil tidak pasti dari mendeteksi anti-HCV,” yang dikeluarkan oleh seorang pekerja laboratorium kepada seorang dokter, tidak hanya terbukti ketika melakukan tes konfirmasi, tetapi juga secara rutin menguji keberadaan anti-HCV. Kebutuhan untuk interpretasi hasil tersebut merupakan cerminan dari status diagnosis laboratorium hepatitis C saat ini.

    PENETAPAN IgM ANTI-HCV. Saat ini, kit diagnostik untuk mendeteksi IgM anti-HCV oleh perusahaan telah dibuat dan diproduksi secara komersial: "Vektor Terbaik"; "Sistem Diagnostik"; Imbio, Abbott, dan lain-lain. Pada tahap desain kit diagnostik, kit ELISA diciptakan, berdasarkan peptida yang dikodekan oleh berbagai daerah dari RNA HCV [20]. Pilihan ini dibuat pada peptida yang dikodekan oleh daerah Inti RNA HCV dan deteksi antibodi IgM untuk itu. Seperti halnya penggunaan tes untuk mendeteksi anti-HCV (IgG), hasil positif palsu dapat dicatat dalam tes IgM anti-HCV. Menurut Stevensona D.L. et al. [21], hingga 70% pasien dengan hepatitis C kronis dengan kehadiran IgM anti-HCV secara bersamaan memiliki peningkatan tingkat faktor rheumatoid, yang berkontribusi pada munculnya hasil positif palsu. Namun, menurut Pawlotsky J.M., keberadaan faktor rheumatoid tidak mempengaruhi kualitas pendeteksian IgM anti-HCV [22].

    PENETAPAN ANTIVEN HCV. Kemampuan mendeteksi antigen HCV menarik perhatian para peneliti segera setelah penemuan virus. Kemungkinan utama pengujian mereka ditunjukkan oleh K. Krawczynski et al. [23], yang secara imunohistokimia mendeteksi antigen HCV dalam jaringan hati, membuktikan kekhususan dari cahaya immunofluorescent. Penggunaan antibodi poli dan monoklonal terhadap berbagai antigen HCV mengungkapkan adanya inti Ag HCV, antigen yang dikodekan oleh zona NS3 dan NS4 dari RNA HCV pada nukleus hepatosit dan sitoplasma pada 60-90% pasien dengan HS kronis. [24]. Namun, penelitian lebih lanjut menunjukkan bahwa Antigen HCV dapat dideteksi dalam kurang dari 5% sel hati.

    Sistem tes diagnostik pertama ("Ortho Antibody to Core Antigen (Murine Monoclonal) EL1SA Test System" dan "Imucheck F-HCV Ag Core Kokusai") untuk mendeteksi antigen HCV muncul di pasar untuk persiapan imunobiologis pada tahun 1999. Target untuk deteksi adalah antigen Inti dari HCV, yang ditentukan menggunakan varian ELISA fase padat yang dirancang atas dasar antibodi monoklonal. Studi pertama pada penggunaan tes ini menentukan sensitivitas tinggi, spesifisitas, dan prospek aplikasi, terutama dalam layanan transfusi darah [25,26]. Terpasang:

  • kemampuan untuk menentukan Inti Ag HCV dalam serum atau plasma;
  • spesifisitas deteksi Inti Ag HCV;
  • kehadiran orang-orang dengan antigen yang bersirkulasi dalam darah seronegatif untuk anti-HCV;
  • deteksi sering (90,3%) dari Core Ag HCV dalam serum dengan kehadiran anti-HCV dan HCV RNA [25];
  • korelasi langsung antara konsentrasi RNA HCV dan deteksi Core Ag HCV [25];
  • kontraksi fase “jendela” - dari saat infeksi hingga hasil positif pertama dari deteksi anti-HCV. Ditetapkan bahwa Core Ag HCV dapat dideteksi pada 83% kasus (n = 24) hari berikutnya setelah deteksi pertama RNA HCV [26] dan panjang (rata-rata 26 hari) sebelum munculnya anti-HCV [27].

    METODE DETEKSI RNA HCV. Tahap modern diagnosis laboratorium hepatitis C dapat dicirikan sebagai tahap permulaan penggunaan metode biologi molekuler secara luas untuk mendeteksi RNA HCV. Sebagian besar metode deteksi asam nukleat telah diuji untuk mendeteksi RNA HCV. Sejumlah besar tinjauan literatur yang diterbitkan baik dalam bahasa Rusia [28] dan publikasi asing [29] dikhususkan untuk prinsip-prinsip perancangan produk diagnostik dan penggunaannya untuk mendeteksi DNA virus atau RNA. Semua metode ini dapat dibagi menjadi dua kelompok, yang didasarkan pada penerapan prinsip hibridisasi tanpa amplifikasi dari bagian yang dipilih dari asam nukleat atau dengan amplifikasi mereka, yang dapat meningkatkan resolusi metode secara signifikan.

    Metode hibridisasi didasarkan pada kombinasi probe hibridisasi berlabel (rekayasa genetika atau struktur molekul sintetis yang mengandung urutan nukleotida yang melengkapi bagian RNA yang dipilih). Analisis hasil dilakukan sesuai dengan intensitas sinyal yang berasal dari label dalam komposisi kompleks yang terbentuk.

    Pada hepatitis C, metode ini mendeteksi RNA HCV terutama telah digunakan untuk mengidentifikasi secara langsung di hepatosit, dan dalam tes yang disebut sebagai hibidisasi in situ [30]. Kemungkinan deteksi langsung RNA HCV dalam jaringan memungkinkan untuk mendeteksi dalam sel darah mononuklear, sel kelenjar ludah dan jaringan lain dari tubuh pasien dengan hepatitis C [31,32].

    Metode hibridisasi yang digunakan untuk mendeteksi RNA HCV memungkinkan untuk menunjukkan adanya rantai RNA HCV negatif (replikatif), yang menunjukkan replikasi aktif dari virus [33].

    Metode reaksi berantai polimerase saat ini merupakan teknik metodis yang paling banyak digunakan yang mendasari hampir semua metode biologi molekuler untuk mendeteksi RNA HCV. Selain itu, penentuan RNA HCV mungkin baik dalam bentuk kualitatif dan kuantitatif, yang sangat penting untuk pengangkatan, pemantauan dan evaluasi efektivitas terapi terapan.

    Varian utama dari metode ini adalah:

  • polymerase chain reaction (PCR);
  • reaksi berantai ligase;
  • NASBA;
  • TMA (reaksi amplifikasi yang dimediasi transkripsi, amplifikasi yang dimediasi transkripsi).

    Polymerase chain reaction adalah metode deteksi RNA HCV yang banyak digunakan, baik di Rusia maupun di luar negeri. Hal ini didasarkan pada proses multi-siklus, menyerupai replikasi alami asam nukleat, dengan setiap siklus yang terdiri dari tahapan berturut-turut.

    Dari materi yang dipelajari (serum atau plasma darah, biopsi hati), RNA HCV diisolasi. Mempertimbangkan bahwa asam nukleat HCV diwakili oleh RNA, dan molekul cDNA diperlukan untuk amplifikasi, menggunakan enzim reverse transcriptase, pembentukan molekul cDNA HCV single-strand terjadi. Pada tahap berikutnya, apa yang disebut “HCV” dilekatkan pada bagian spesifik dari masing-masing rantai HCV cDNA primer adalah oligonukleotida pendek yang melengkapi urutan nukleotida yang diketahui. Perbandingan struktur primer wilayah 5'UTR genom dari isolat HCV yang berbeda mengungkapkan variabilitas tidak signifikan (antara genotipe, homologi nukleotida - 92-98%, dan dalam genotipe 98-99%). Ini membuatnya lebih baik memilih primer dari zona RNA HCV ini dan penggunaannya dalam sistem uji diagnostik yang diproduksi di negara kita dan di luar negeri.

    Selanjutnya, dengan bantuan enzim DNA-dependent polymerase DNA, sintesis segmen DNA baru terjadi. Saat ini, bakteri Thermophilus termus (Tth polymerase) atau Thermophilus aquaticus (Taq polimerase) paling sering digunakan sebagai sumber enzim ini. Memiliki stabilitas termal di hadapan ion mangan dan magnesium, enzim ini dapat secara simultan digunakan untuk mensintesis molekul cDNA HCV single-stranded dan memperkuat daerah cDNA terpilih. Pada tahap akhir dari satu siklus reaksi, menggunakan DNA polimerase, sintesis untaian baru HCV cDNA komplementer terjadi. Beberapa pengulangan siklus reaksi mengarah pada akumulasi fragmen HCV cDNA, yang dapat didaftarkan menggunakan elektroforesis gel poliakrilamid yang diikuti dengan deteksi visual atau menggunakan hibridisasi dengan probe oligonukleotida, yang meningkatkan sensitivitas dan spesifisitas produk diagnostik yang digunakan. Penggunaan primer yang diberi label dengan enzim memungkinkan untuk merekam hasil PCR menggunakan enzim immunoassay.

    Tujuan konstan bagi peneliti yang merancang sistem diagnostik untuk mendeteksi RNA HCV adalah untuk meningkatkan sensitivitas dan spesifisitas. Tujuan ini dilayani oleh varian PCR, yang ditentukan - "PCR bersarang" (PCR bersarang) [34]. Ciri khas metode ini dari "klasik" adalah penggunaan simultan dari dua pasang primer, salah satunya adalah pelengkap bagian internal amplikon yang diperoleh setelah putaran pertama amplifikasi. Pada saat yang sama, diyakini bahwa dengan varian PCR ini terdapat risiko kontaminasi sampel yang lebih tinggi, yang dapat menyebabkan hasil positif palsu [35].

    Kebutuhan akut untuk penentuan RNA HCV dan kesulitan yang terkait dengan produksi skala besar kit diagnostik yang sangat sensitif dan spesifik untuk diagnostik PCR telah menentukan penggunaan persiapan secara luas yang dilakukan di laboratorium ilmiah. Perbandingan sistem uji ini, apa yang disebut "rumah" tes ("di rumah tes"), menunjukkan variabilitas tinggi dalam sensitivitas dan spesifisitas, serta kurangnya reproduktifitas hasil antara laboratorium dan serangkaian produk diagnostik. Dengan demikian, ketika melakukan siklus pertama Eropa "eksternal" kontrol kualitas untuk mendeteksi HCV RNA (1996) dari 136 laboratorium, hanya 22 (16%) yang mampu menentukan dengan benar ada atau tidak adanya RNA virus dalam sampel kontrol yang disediakan [36]. Hasil serupa tercatat di negara kita, selama pekerjaan serupa di bawah sistem Federal kontrol kualitas eksternal (2001), ketika dari 14 laboratorium yang berpartisipasi hanya 3 (21,4%) yang mampu menyelesaikan tugas dengan benar [37].

    Alasan munculnya hasil false-negatif dan false-positif dari deteksi RNA HCV beragam. Untuk hasil negatif palsu:
    - kehilangan atau kerusakan RNA HCV dalam persiapan untuk respon bahan klinis;
    - kehadiran dalam sampel inhibitor yang mempengaruhi berbagai komponen PCR. Inhibitor ini diwakili oleh berbagai zat kimia atau protein. Sebagai contoh: kehadiran dalam cairan sperma inhibitor reverse transcriptase tidak memungkinkan mendeteksi RNA HCV dan berbicara tentang kemungkinan untuk mewujudkan transmisi seksual hepatitis C [38]; kehadiran hepaprine [39]; kadar serum cryoglobulin yang tinggi [40];
    - tidak sesuai dengan penyimpanan termal dan transportasi bahan klinis. Untuk hasil positif palsu:
    - kontaminasi antara sampel (saat memproses sampel dan / atau bekerja dengan campuran reaksi), termasuk kontaminasi dengan sampel kontrol positif;
    - kontaminasi dengan produk pra-amplifikasi (amplikon) yang dapat mencemari sampel uji dan solusi melalui aerosol atau peralatan laboratorium.

    Pengenalan besar-besaran diagnostik PCR dengan definisi RNA HCV telah menetapkan tugas transisi ke tingkat baru penelitian laboratorium untuk otoritas perawatan kesehatan. Isolasi zona terisolasi untuk pelaksanaan tahap utama PCR (untuk persiapan sampel; amplifikasi; untuk memperhitungkan hasil yang diperoleh); kit terpisah untuk setiap tahap pakaian laboratorium reaksi, pipet otomatis; keberadaan kit diagnostik standar dan, yang paling penting, kehadiran staf laboratorium berkualifikasi tinggi mengurangi terjadinya hasil yang salah.

    Kit standar pertama untuk menentukan RNA HCV ("AmplicorTM HCV", "Roche Diagnostic Systems") diproduksi pada tahun 1993. Selama bertahun-tahun, kit RNA HCV telah berevolusi, tujuan utamanya adalah untuk meningkatkan sensitivitas dan spesifisitas mereka. Ketika merancang Amplicor TM HCV, beberapa metode asli digunakan untuk mengidentifikasi 100 atau lebih salinan HCV RNA per ml., Serta untuk menangani kemungkinan kasus kontaminasi sampel dan solusi yang digunakan dalam kit. Penggunaan enzim - ampere dan deixiuridine triphosphate (dUTP) memungkinkan untuk menghancurkan pada siklus pertama amplifikasi aplikasi sebelumnya yang dapat menyebabkan kontaminasi. Penghancuran amplifikasi pada akhir siklus amplifikasi pertama (pada +55 ° C) tidak memungkinkan enzim untuk menghancurkan amplikon yang dipilih sebagai target. Inovasi utama adalah pengenalan pengendalian internal. Arti dari inovasi ini terletak pada pengenalan urutan yang mirip dengan daerah RNA HCV yang diperkuat ke setiap sampel uji, yang kemudian dideteksi menggunakan primer yang sesuai dalam reaksi amplifikasi dalam mode yang sama. Tidak adanya reaksi positif dalam deteksi kontrol internal menunjukkan adanya hasil negatif palsu dari reaksi terhadap keberadaan RNA HCV dalam sampel yang diteliti. Generasi selanjutnya didiagnosis dengan obat, yang ditetapkan “HCV Amplicor 2.0,” yang ketika digunakan, memiliki batas sensitivitas 50 molekul RNA HCV.

    Sistem untuk mendeteksi RNA HCV menggunakan perangkat Roche tidak dapat dipertimbangkan secara terpisah dari instrumentasi mereka, yang menentukan kualitas pengujian yang tinggi. Para pengembang metode berusaha untuk sepenuhnya mengotomatisasi semua tahapan reaksi. Perwujudan dari ide ini adalah sistem "COBASAmpliPrepTM", yang memungkinkan Anda untuk sepenuhnya mengotomatiskan proses isolasi RNA HCV, amplifikasi dan deteksi, sehingga mengurangi risiko hasil positif palsu dan hasil negatif palsu, sambil mempertahankan sensitivitas dan spesifisitas tinggi [41].

    Reaksi berantai Ligase untuk mendeteksi HHC RNA. (LCR). Metode ini didasarkan pada kemampuan enzim "DNA-dependent DNA ligase" untuk menjahit (ligat) istirahat ikatan fosfodiester dalam DNA dengan adanya ATP dan ion Mg 2+. Seperti PCR “klasik” untuk mendeteksi RNA HCV, tahap pertama dari LCR adalah transkripsi terbalik untuk menghasilkan HCV cDNA. Lebih lanjut, DNA ligase mengikat dua pasangan primer (melengkapi zona uncari HCR RNA), yang diperkuat lebih lanjut. Deteksi produk amplifikasi LCR dilakukan dengan memperhatikan reaksi antigen-antibodi. Masing-masing dari dua primer diberi label dengan hapten yang berbeda. Yang pertama ditangkap oleh antibodi teradsorpsi pada mikropartikel. Setelah prosedur pencucian menggunakan sepasang antibodi kedua yang diberi label fluoresen, mereka secara selektif berinteraksi dengan hapten dalam produk amplifikasi, diikuti dengan reaksi substrat dan menghitung pada fluorimeter.

    Sensitivitas metode ini adalah sekitar 200 salinan RNA HCV per ml, yang memungkinkan penggunaannya untuk memecahkan berbagai masalah diagnostik klinis [42]. Saat ini, kit diagnostik untuk mendeteksi RNA HCV berdasarkan LCR diproduksi oleh Abbott.

    Nucleic Acids Seaquence Amplification - Metode NASBA untuk mendeteksi RNA HCV didasarkan pada aksi simultan dari tiga enzim: avian myeloblastoma reverse transcriptase, RNAase dan RNAase polimerase RNA [43.]. Tidak seperti RT PCR, langkah pertama tidak membalikkan transkripsi RNA HCV. Menggunakan enzim yang digunakan, lebih dari 10 (9) salinan wilayah HCV cDNA dapat diperoleh dalam 90 menit [44]. Kemungkinan melakukan reaksi pada suhu rendah (+41 C) sangat menyederhanakan pekerjaan dan menghilangkan kebutuhan peralatan yang menyediakan perubahan siklikal dalam suhu tinggi. Rekaman hasil reaksi dilakukan menggunakan electrochemiluminescence. Terlepas dari kenyataan bahwa NASBA dekat dengan RT PCR dalam sensitivitasnya, metode ini tidak banyak digunakan untuk mendeteksi RNA HCV. Saat ini, varian dari metode sedang dikembangkan yang menggabungkan prinsip-prinsip NASBA dan "Real-time RT PCR".

    Metode transkripsi-mediated amplification (TMA) berbeda dari PCR dan LCR terutama karena langsung memperkuat fragmen RNA HCV, dan bukan HCV cDNA. Pada tahap awal reaksi, primer (No. 1) dilekatkan pada RNA HCV dan salinan molekul target, cDNA, disintesis menggunakan enzim (reverse transcriptase). Reverse transcriptase, memiliki juga aktivitas RNase-H, menghancurkan RNA virus dalam RNA-cDNA hibrida. Selanjutnya, primer kedua melekat pada molekul cDNA, diikuti oleh penyelesaian DNA beruntai ganda menggunakan reverse transcriptase. Dengan bantuan enzim β-RNA polimerase lain, RNA ditranskripsi dari cDNA, yang mengarah pada pembentukan 100 hingga 1000 salinan amplikon RNA HCV dalam satu siklus reaksi. Primer No. 2 dilekatkan pada aplikasi RNA ini dengan sintesis lebih lanjut dari salinan cDNA dan penghancuran molekul RNA. Melampirkan primer No. 1 ke cDNA diikuti dengan penyelesaian DNA untai ganda memicu siklus amplifikasi berikutnya. Pencatatan hasil reaksi dilakukan pada lumenometer, karena amplikon RNA yang dihasilkan khusus berinteraksi dengan probe DNA berlabel chemilumines.

    Sebagai keuntungan dari metode TMA dalam mendeteksi RNA HCV, hal ini dicatat:

  • melakukan reaksi pada suhu yang lebih rendah dibandingkan dengan PCR;
  • pembentukan sejumlah besar amplikon dalam satu siklus reaksi, yang mengurangi waktu yang dibutuhkan untuk mendapatkan hasil akhir (30–40 menit) dan meningkatkan sensitivitas reaksi (50) [45].
  • mengurangi risiko kontaminasi, karena RNA kurang stabil daripada DNA.

    Studi komparatif tentang deteksi RNA HCV menggunakan TMA dan metode lain telah menunjukkan tingkat tinggi kebetulan hasil [45].

    Kombinasi dari prinsip hibridisasi dan amplifikasi mendasari metode mendeteksi RNA HCV, yang ditetapkan sebagai "Metode hibridisasi menggunakan probe bercabang atau pengujian DNA Bermerek (bDNA) [46]. Tidak seperti PCR, tes ini menguatkan bukan molekul HCV cDNA, tetapi sinyal. Reaksi dilakukan di 96 lempeng sumur di mana fragmen RNA HCV dari zona 5 ′ yang tidak ditranslasikan dan gen inti RNA HCV teradsorpsi, karena pengikatan berikutnya ke molekul DNA dan hibridisasi bercabang sintetis dengan sampel berlabel fosfatase alkalin dengan peningkatan tajam dalam sinyal yang diterima dicapai dengan penguat dan reaksi enzimatik berikutnya. Saat ini, diagnostik generasi ketiga telah muncul di pasar diagnostik (Vaueg 3.0 Hepati-tis C Virus RNA), yang memiliki kepekaan untuk mendeteksi 520 IU / ml (2500 salinan RNA HCV).

    DETEKSI QUANTITATIVE RNA HCV. Untuk menilai konsentrasi RNA HCV digunakan versi kuantitatif PCR. Awalnya, konsentrasi RNA HCV dicirikan oleh nilai-nilai ordinal, seperti "+", "++", dll, secara visual mencerminkan intensitas pita yang diperoleh oleh elektroforesis produk amplifikasi, atau dengan metode pengenceran akhir, yaitu dengan adanya hasil positif di akhir titrasi titik. Kesulitan standarisasi semua tahapan PCR tidak memungkinkan penilaian objektif dari konsentrasi RNA HCV, yang mengarah ke kesalahan signifikan dalam interpretasi hasil yang diperoleh.

    Saat ini, hasil penelitian dinyatakan dalam unit kuantitatif: jumlah salinan RNA HCV yang terkandung dalam 1 ml., Secara absolut atau istilah logaritma (log 10). Berdasarkan fakta bahwa konsentrasi RNA HCV terdeteksi mencerminkan jumlah partikel virus, indikator ini disebut sebagai "setara viral (eq)", dengan penambahan awalan k (kilogram, seribu) atau M (juta). Cara lain untuk mengekspresikan jumlah partikel virus adalah setara berat badan mereka. Misalnya, dalam gram atau pikogram (1 pg setara dengan sekitar 1 juta eq). Berbagai nilai yang digunakan membuatnya sulit untuk menginterpretasikan hasil yang diperoleh di berbagai laboratorium. Oleh karena itu, Komite Pakar WHO tentang Standar Biologi telah menghasilkan "sampel standar internasional" yang mengandung RNA HCV (serum kering beku yang mengandung RNA HCV dari genotipe pertama), konsentrasi yang dinyatakan dalam unit internasional (IU / mL) [47]. Koefisien khusus memungkinkan Anda untuk menghitung ulang indikator konsentrasi yang diperoleh di unit internasional.

    Hampir semua varian PCR digunakan untuk menentukan konsentrasi RNA HCV. Dalam hal ini, sejumlah persyaratan khusus dikenakan pada persiapan diagnostik, yang paling penting adalah linearitas yang ketat dari hasil, yaitu peningkatan sinyal dari reaksi yang tercatat dengan peningkatan konsentrasi RNA HCV dalam sampel yang diteliti. Penggunaan standar internal dengan berbagai tingkat RNA HCV memungkinkan kita untuk menghindari banyak kesalahan metodologis yang dapat mempengaruhi hasil akhir dari reaksi [28]. Sensitivitas diagnostik yang diterapkan (Amplicor HCV Monitor v2.0; Uji RNA Kuantitatif HCV HCV) memungkinkan untuk mendeteksi RNA HCV mulai dari 50 salinan per ml [48,49], yang sangat penting untuk memprediksi efektivitas terapi antiviral yang dipilih.

    PCR Real-time ("RT PCR Real-time") adalah salah satu opsi yang paling menjanjikan untuk metode kuantitatif untuk mendeteksi RNA HCV. Metode dan perangkat kerasnya dikembangkan bersama oleh spesialis dari Roche dan Percin Elmer. Prinsip dari metode ini adalah kemampuan untuk menghidrolisis urutan cDNA ke arah 5 '---- 3'. Reaksi menggunakan probe khusus yang diberi label dengan dua pewarna fluoresen yang memiliki daya serap dan fluoresensi yang sama. Di hadapan produk amplifikasi, Tag polimerase memotong probe, yang mencegah transfer energi dari satu molekul pewarna ke yang lain, dan dengan demikian mencegah pelepasan kuantum cahaya. Instrumen khusus mencatat reaksi dan pemodelan matematika dari kinetika fluoresensi pada setiap tahap reaksi, yang memungkinkan memperoleh informasi tentang konsentrasi awal RNA HCV.

    Ciri khas "PCR real-time" adalah kemampuan untuk memperoleh informasi tentang keberadaan RNA HCV secara langsung dalam proses reaksi, yang memungkinkan untuk mengurangi waktu analisis dalam kombinasi dengan sensitivitas dan linearitas yang tinggi dari hasil [50]. Menurut Tatyana Yashina dan rekan-penulis, metode ini dapat mendeteksi 200 salinan RNA HCV per ml. [51].

    METODE GENOTYPING HCV RNA. Definisi HCV yang termasuk ke dalam genotipe dan subtipe tertentu telah diterapkan untuk menyelesaikan tidak hanya masalah ilmiah, tetapi juga praktis. Misalnya: mencari sumber infeksi selama wabah hepatitis C atau memprediksi efektivitas terapi yang digunakan.

    “Standar emas” genotip HCV adalah penentuan langsung struktur primer RNA HCV dengan analisis filogenetiknya berikutnya [52], yang memungkinkan untuk secara jelas mengkarakterisasi isolat virus ini. Informasi ini dapat diperoleh dengan menggunakan opsi pengurutan berikut:

  • langsung;
  • berdasarkan kloning standar;
  • sekuensing produk reaksi PCR (sekuensing terbatas).
    Meskipun akurasi hasil, metode pengurutan langsung tidak digunakan dalam perawatan kesehatan praktis karena kesulitan teknis penelitian dan tingginya biaya pekerjaan. Pada saat yang sama, ketersediaan informasi tentang struktur utama RNA HCV adalah metode referensi untuk genotip, dan ketersediaan instrumen untuk penyurutan otomatis menyederhanakan mendapatkan hasilnya.

    Saat ini, dalam banyak kasus, metode berdasarkan penggunaan PCR dengan primer tipe-spesifik digunakan untuk genotyping HCV RNA. Untuk pertama kalinya, genotipe RNA HCV dilakukan oleh N. Okamoto dan rekan penulis pada tahun 1992 menggunakan RT-PCR [53], yang mencakup dua langkah amplifikasi. Yang pertama dari mereka dilakukan dengan universal, untuk semua genotipe HCV, primer, yang kedua dengan campuran primer tipe-spesifik dengan memperoleh produk amplifikasi spesifik dengan berbagai panjang. Kehadiran genotipe tertentu dinilai berdasarkan ukuran produk yang diperkuat. Sebagai primer, probe khusus jenis digunakan, informasi tentang yang terletak di 5'UTR, Core atau NS5 - RNVGS daerah [54].

    Hibridisasi produk yang diperkuat dengan probe gen spesifik yang teradsorpsi (dari zona RNA HCV 5'-tidak diterjemahkan) teradsorpsi pada membran nitroselulosa yang mendasari uji yang dinamakan "INNO-LiPA HCV, INNO-GENETICS" [55]. Awalnya, menggunakan tes ini, adalah mungkin untuk mengetik genotipe: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3b; 4 dan 5a. Di masa depan, sistem uji generasi ke-2 "INNO-LiPA HCV II, INNOGENETIKA" memungkinkan kita untuk membedakan semua 6 genotipe dan tambahan 2c; 2d; 2i; 3c; 4a-h; 6a dan 10a. [56]

    Senjata metodologis untuk menentukan genotipe HCV tidak terbatas pada metode di atas dan mencakup berbagai metode:

  • genotip berdasarkan analisis profil pembatasan produk yang diperkuat (RFLP). Produk amplifikasi fragmen RNA HCV (5'UTR - wilayah atau wilayah NS5 dari RNA HCV) dibelah oleh enzim restriksi. Fragmen yang dihasilkan berbeda panjangnya tergantung pada situs pembatasan di dalamnya, yang dibelah. Hasil elektroforesis dan perbandingannya memungkinkan kami untuk mengidentifikasi genotipe HCV dalam sampel yang diteliti [57]. Perbandingan hasil genotipe oleh PCR-RFLP dengan sekuensing data menunjukkan tingkat tinggi kebetulan hasil - 95% [58].
  • genotyping berdasarkan metode SSCP (evaluasi polimorfisme konformasi dari fragmen DNA beruntai tunggal). Wilayah RNA HCV 5'-tidak diterjemahkan, yang memiliki set variasi nukleotida minimal yang membedakan genotipe satu sama lain, dipilih sebagai objek penelitian. Fakta ini menentukan kemungkinan menerapkan primer umum selama genotipe [59].

    SEROTYPING Anti-HCV dimungkinkan oleh penelitian oleh P. Simmonds dan rekan-penulis yang menetapkan keberadaan antibodi yang diarahkan ke epitop spesifik genotipe, informasi tentang yang dikodekan oleh bagian NS4 dari HCV RNA [60]. Dengan bantuan diagnosticum untuk ELISA, dibangun atas dasar peptida sintetis, adalah mungkin untuk membedakan antara kasus hepatitis C yang disebabkan oleh virus 1, 2 dan 3 genotipe (89% sesuai dengan hasil genotipe). Pengembangan sistem pengujian menggunakan antigen sintetis dan rekombinan yang dikodekan oleh NS4 dan zona inti dari RNA HCV memungkinkan kami untuk memperluas daftar jenis varian virus, serta untuk menilai keberadaan subtipe (1a, lb, 2a, 2b, 3a, 4a) [61,62]. Saat ini, produksi komersial produk diagnostik untuk serotyping dilakukan dalam versi spot ELISA - "Murekh NA 1-6 Serotyping Assay, Murex Diagnostics", dan dalam varian "immunoblot" - RIBA HCV Serotyping Assay, Chiron Diagnostics. Data komparatif dari hasil serotyping dan genotip RNA HCV menunjukkan tingkat kebetulan yang tinggi, mencapai 95% [62].

    Serotyping anti-HCV dibandingkan dengan genotipe RNA HCV memiliki kelebihan seperti kemudahan reaksi dan biaya yang lebih rendah. Pada saat yang sama, metode ini sama sekali tidak dapat menggantikan genotyping. Hasil serotipe anti-HCV menunjukkan tipe anti-HCV dengan infeksi saat ini atau sebelumnya. Dalam beberapa kasus (paling sering pada pasien dengan hemofilia), deteksi simultan anti-HCV dari subtipe yang berbeda dicatat, yang mungkin menunjukkan beberapa infeksi dengan subtipe yang berbeda dan genotipe HCV [63]. Selain itu, pada pasien dengan hepatitis C dengan latar belakang status imunodefisiensi diucapkan, RNA mungkin satu-satunya penanda, yang membuatnya tidak mungkin untuk melakukan serotyping.

    IDENTIFIKASI DAN PENGOBATAN HASIL PENGUJIAN INFEKSI PENYEBAB SERANGGA NKT. Kehadiran berbagai macam penanda serologi dari infeksi HCV saat ini atau sebelumnya, serta basis metodologis modern, memungkinkan untuk memecahkan banyak masalah diagnosis laboratorium dan pencegahan hepatitis C. Tabel 2 menunjukkan penanda serologi infeksi HCV dan area terpenting dari pengujian mereka.

    Tabel 2
    Signifikansi diagnostik dari penanda infeksi HCV saat ini atau sebelumnya

    Pemutaran
    dalam layanan
    darah

    Konfirmasi
    menunggu
    hasil
    + anti-HCV

    Salah satu tugas utama dari diagnosis laboratorium hepatitis C adalah untuk mendiagnosis dan membedakan akut dari hepatitis C kronis dengan mengidentifikasi penanda serologi infeksi. Seperti hepatitis virus akut lainnya, penanda serologis infeksi HCV secara konsisten muncul dan menghilang dalam perjalanan infeksi dan proses penyembuhan (Gambar 2).

    RNA HCV dapat dideteksi pada hari ke 7-21 setelah terinfeksi HCV, dan anti-HCV pada hari ke 20-150 (rata-rata 50 hari) [64]. Spektrum anti-HCV dapat bervariasi tergantung pada periode hepatitis akut. Dipercaya bahwa yang pertama mampu mengidentifikasi antibodi yang dikodekan oleh zona Core dan NS5 dari RNA HCV. Anti-HCV untuk protein yang dikodekan oleh zona NS4 tidak ada pada fase akut hepatitis C [65]. Sebuah studi perbandingan tingkat konsentrasi anti-HCV, spektrum anti-HCV dan HCV RNA pada pasien dengan hepatitis akut dan kronis menunjukkan beberapa perbedaan [66]. Menurut pendapat kami, perbedaan ini mungkin terkait dengan karakteristik individu dari proses infeksi, yang mengurangi nilai diagnostiknya.

    Fig. 2. Hepatitis C akut

    Dengan analogi dengan laboratorium diagnostik hepatitis A dan B, diharapkan bahwa penentuan antibodi untuk HCV kelas IgM akan memiliki nilai diagnostik sebanyak IgM anti-HAV dan IgM anti-HBc. Namun, data tes dari serum pasien dengan hepatitis C akut dan kronis untuk kehadiran IgM anti-HCV menunjukkan bahwa mereka sering ditemukan di antara pasien ini - 50-93% dan 50-70%, masing-masing [67,68]; hasil ini menunjukkan bahwa deteksi IgM anti - HCV tidak dapat digunakan sebagai penanda infeksi HCV akut.

    Tidak adanya penanda yang mengklaim peran standar "emas" dari hepatitis C akut menentukan kebutuhan untuk penilaian komprehensif dari hasil yang diperoleh, berdasarkan pengamatan dinamis pasien.

    Tidak ada arah yang kurang penting dari penggunaan metode yang sangat sensitif untuk menguji RNA HCV - mengurangi risiko pengembangan pasca-transfusi hepatitis C. Kebutuhan untuk pekerjaan tersebut ditentukan oleh adanya fase "jendela", yaitu. waktu antara deteksi pertama RNA HCV dan munculnya anti-HCV, serta keberadaan donor darah (pasien dengan hepatitis C kronis) yang memiliki RNA HCV tanpa adanya anti-HCV. Sistem saat ini untuk memantau donor darah untuk HCV hanya mencakup tes anti-HCV, dan risiko infeksi hepatitis C tetap ada. Berdasarkan ini, pertanyaan pengujian darah untuk keberadaan RNA HCV menggunakan metode modern (metode NAT - "uji amplifikasi asam nukleat") adalah sah. Faktor yang membatasi pekerjaan ini adalah tingginya biaya penelitian. Untuk mengurangi biaya, dianjurkan untuk menguji kumpulan sera darah (dari 8 hingga 96 sampel) diikuti dengan pencarian sampel positif dalam kasus deteksi RNA HCV dalam kumpulan sera. Dengan mempertimbangkan faktor pengenceran RNA HCV yang diinginkan ketika menyemai serum darah, pertanyaan menggunakan metode deteksi yang paling sensitif menjadi sangat penting. Dipercaya bahwa penggunaan kit diagnostik untuk NAT - dengan sensitivitas 50-100 IU / mL dapat secara signifikan mengurangi risiko pasca-transfusi hepatitis C.

    Tidak diragukan lagi, daftar masalah yang dapat dipecahkan ketika menguji seluruh spektrum penanda infeksi HCV tidak terbatas pada dua area ini. Ketersediaan metode pengujian modern dalam kombinasi dengan pengetahuan tentang kemampuan mereka membuka prospek luas untuk pekerjaan ilmiah dan terapan pada hepatitis C.


  • Artikel Terkait Hepatitis