Hepatitis C virus (HCV), cor, NS3, NS4, NS5 antigen, antibodi IgG

Share Tweet Pin it

Kekalahan hati dengan virus tipe C adalah salah satu masalah akut spesialis penyakit infeksi dan hepatologis. Untuk penyakit ini karakteristik masa inkubasi yang panjang, di mana tidak ada gejala klinis. Pada saat ini, pembawa HCV adalah yang paling berbahaya karena tidak tahu tentang penyakitnya dan mampu menginfeksi orang sehat.

Untuk pertama kalinya tentang virus mulai berbicara pada akhir abad ke-20, setelah itu penelitian skala penuh dimulai. Hari ini diketahui tentang enam bentuk dan sejumlah besar subtipe. Keragaman struktur seperti itu adalah karena kemampuan patogen bermutasi.

Dasar dari pengembangan proses inflamasi-inflamasi di hati adalah penghancuran hepatosit (sel-selnya). Mereka hancur di bawah pengaruh langsung virus dengan efek sitotoksik. Satu-satunya kesempatan untuk mengidentifikasi agen patogen pada tahap praklinik adalah diagnosis laboratorium, yang melibatkan pencarian antibodi dan kit genetik virus.

Apa antibodi hepatitis C dalam darah?

Seseorang yang jauh dari obat-obatan, sulit untuk memahami hasil studi laboratorium, tidak tahu tentang antibodi. Faktanya adalah bahwa struktur patogen terdiri dari kompleks komponen protein. Setelah memasuki tubuh, mereka menyebabkan sistem kekebalan bereaksi, seolah mengganggu dengan kehadirannya. Dengan demikian memulai produksi antibodi terhadap antigen-antigen hepatitis C.

Mereka bisa dari beberapa tipe. Karena evaluasi komposisi kualitatif mereka, dokter berhasil mencurigai infeksi seseorang, serta untuk menetapkan tahap penyakit (termasuk pemulihan).

Metode utama untuk mendeteksi antibodi terhadap hepatitis C adalah immunoassay. Tujuannya adalah untuk mencari Ig spesifik, yang disintesis sebagai respons terhadap penetrasi infeksi ke dalam tubuh. Perhatikan bahwa ELISA memungkinkan untuk mencurigai penyakit, setelah itu diperlukan reaksi polymerase chain lebih lanjut.

Antibodi, bahkan setelah kemenangan penuh atas virus, tetap selama sisa hidup mereka dalam darah manusia dan menunjukkan kontak masa lalu kekebalan dengan patogen.

Fase penyakit

Antibodi terhadap hepatitis C dapat menunjukkan tahap proses inflamasi-inflamasi, yang membantu spesialis untuk memilih obat antiviral yang efektif dan melacak dinamika perubahan. Ada dua fase penyakit:

  • laten. Seseorang tidak memiliki gejala klinis apa pun, terlepas dari fakta bahwa ia sudah menjadi pembawa virus. Pada saat yang sama, tes antibodi (IgG) terhadap hepatitis C akan positif. Tingkat RNA dan IgG kecil.
  • akut - ditandai dengan peningkatan titer antibodi, khususnya IgG dan IgM, yang menunjukkan multiplikasi intens patogen dan penghancuran hepatosit. Kehancuran mereka dikonfirmasi oleh pertumbuhan enzim hati (ALT, AST), yang diungkapkan oleh biokimia. Selain itu, agen patogen RNA ditemukan dalam konsentrasi tinggi.

Dinamika positif pada latar belakang pengobatan dikonfirmasi oleh penurunan viral load. Setelah pemulihan, RNA agen penyebab tidak terdeteksi, hanya G imunoglobulin yang tersisa, yang menunjukkan penyakit yang ditransfer.

Indikasi untuk ELISA

Dalam banyak kasus, kekebalan tidak dapat mengatasi patogen itu sendiri, karena ia gagal membentuk respons yang kuat terhadapnya. Hal ini disebabkan oleh perubahan struktur virus, sebagai akibatnya antibodi yang dihasilkan tidak efektif.

Biasanya, ELISA diresepkan beberapa kali, karena hasil negatif (pada awal penyakit) atau positif palsu (pada wanita hamil, dengan patologi autoimun, atau terapi anti-HIV) adalah mungkin.

Untuk mengkonfirmasi atau menyanggah respon ELISA, perlu untuk melakukan kembali setelah satu bulan, serta menyumbangkan darah untuk PCR dan biokimia.

Antibodi terhadap virus hepatitis C diselidiki:

  1. pengguna narkoba suntikan;
  2. pada orang dengan sirosis hati;
  3. jika hamil adalah virus pembawa. Dalam hal ini, ibu dan bayi harus diperiksa. Risiko infeksi berkisar antara 5% hingga 25%, tergantung pada viral load dan aktivitas penyakit;
  4. setelah hubungan seks tanpa kondom. Kemungkinan penularan virus tidak melebihi 5%, namun, dengan cedera pada selaput lendir alat kelamin, homoseksual, serta pecinta seringnya perubahan pasangan, risikonya jauh lebih tinggi;
  5. setelah tato dan tindik badan;
  6. setelah mengunjungi salon kecantikan dengan reputasi buruk, karena infeksi dapat terjadi melalui instrumen yang terkontaminasi;
  7. sebelum menyumbangkan darah, jika seseorang ingin menjadi donor;
  8. paramedis;
  9. pekerja asrama;
  10. baru-baru ini dirilis dari MLS;
  11. jika peningkatan enzim hati (ALT, AST) terdeteksi untuk mengecualikan kerusakan virus pada organ;
  12. berhubungan dekat dengan pembawa virus;
  13. pada orang dengan hepatosplenomegali (peningkatan volume hati dan limpa);
  14. di terinfeksi HIV;
  15. pada seseorang dengan kekuningan kulit, hiperpigmentasi telapak tangan, kelelahan kronis dan rasa sakit di hati;
  16. sebelum operasi yang direncanakan;
  17. saat merencanakan kehamilan;
  18. pada orang dengan perubahan struktural di hati, terdeteksi oleh USG.

Enzim immunoassay digunakan sebagai skrining untuk skrining massal orang dan mencari pembawa virus. Ini membantu mencegah wabah penyakit menular. Perawatan dimulai pada tahap awal hepatitis jauh lebih efektif daripada terapi terhadap latar belakang sirosis hati.

Jenis antibodi

Untuk benar menginterpretasikan hasil diagnosa laboratorium, Anda perlu mengetahui jenis antibodi apa yang ada dan apa yang bisa mereka maksudkan:

  1. Anti-HCV IgG adalah jenis utama antigen yang diwakili oleh imunoglobulin G. Mereka dapat dideteksi selama pemeriksaan awal seseorang, yang memungkinkan untuk mencurigai penyakit. Jika jawabannya positif, ada baiknya memikirkan proses infeksi yang lamban atau kontak kekebalan dengan virus di masa lalu. Pasien membutuhkan diagnosis lebih lanjut menggunakan PCR;
  2. anti-HCVcoreIgM. Penanda jenis ini berarti "antibodi terhadap struktur nuklir" dari agen patogen. Mereka muncul segera setelah infeksi dan menunjukkan penyakit akut. Peningkatan titer diamati dengan penurunan kekuatan pertahanan kekebalan dan aktivasi virus dalam perjalanan penyakit kronis. Ketika remisi adalah penanda positif yang lemah;
  3. anti-HCV total - indikator total antibodi terhadap senyawa protein struktural dari patogen. Seringkali, itu memungkinkan dia untuk secara akurat mendiagnosa tahap patologi. Penelitian laboratorium menjadi informatif setelah 1-1,5 bulan dari saat penetrasi HCV ke dalam tubuh. Antibodi total terhadap virus hepatitis C adalah analisis imunoglobulin M dan G. Pertumbuhan mereka diamati rata-rata 8 minggu setelah infeksi. Mereka bertahan seumur hidup dan menunjukkan penyakit masa lalu atau perjalanannya yang kronis;
  4. anti-HCVNS. Indikatornya adalah antibodi terhadap protein nonstruktural dari patogen. Ini termasuk NS3, NS4 dan NS5. Jenis pertama terdeteksi pada awal penyakit dan menunjukkan kontak kekebalan dengan HCV. Ini merupakan indikator infeksi. Pengawetan berkepanjangan dari tingkat tinggi adalah tanda tidak langsung dari kronisitas proses peradangan virus di hati. Antibodi untuk dua jenis struktur protein yang tersisa dideteksi pada tahap akhir hepatitis. NS4 adalah indikator tingkat kerusakan organ, dan NS5 menunjukkan perjalanan penyakit kronis. Mengurangi titer mereka dapat dianggap sebagai awal dari pengampunan. Mengingat tingginya biaya penelitian laboratorium, itu jarang digunakan dalam praktik.

Ada juga penanda lain - ini adalah HCV-RNA, yang melibatkan pencarian set genetik patogen dalam darah. Tergantung pada viral load, pembawa infeksi mungkin lebih atau kurang menular. Untuk penelitian ini, sistem uji dengan sensitivitas tinggi digunakan, yang memungkinkan untuk mendeteksi agen patogen pada tahap praklinis. Selain itu, dengan bantuan PCR, infeksi dapat dideteksi pada tahap ketika antibodi masih tidak ada.

Saat munculnya antibodi dalam darah

Penting untuk memahami bahwa antibodi muncul pada waktu yang berbeda, yang memungkinkan Anda untuk lebih tepat menetapkan tahap proses inflamasi-inflamasi, menilai risiko komplikasi, dan juga mencurigai hepatitis pada awal perkembangan.

Jumlah imunoglobulin mulai terdaftar dalam darah pada bulan kedua infeksi. Dalam 6 minggu pertama, tingkat IgM meningkat dengan cepat. Ini menunjukkan perjalanan penyakit akut dan aktivitas virus yang tinggi. Setelah puncak konsentrasi mereka, penurunannya diamati, yang menunjukkan awal fase berikutnya dari penyakit.

Jika antibodi G kelas terhadap hepatitis C terdeteksi, perlu dicurigai akhir dari tahap akut dan transisi dari patologi ke yang kronis. Mereka terdeteksi setelah tiga bulan dari saat infeksi di dalam tubuh.

Kadang-kadang antibodi total dapat diisolasi pada bulan kedua dari penyakit.

Adapun anti-NS3, mereka terdeteksi pada tahap awal seroconversion, dan anti-NS4 dan -NS5 - pada tahap selanjutnya.

Penguraian penelitian

Untuk mendeteksi imunoglobulin menggunakan metode ELISA. Ini didasarkan pada reaksi antigen-antibodi, yang berlangsung di bawah aksi enzim khusus.

Biasanya, total indeks tidak tercatat dalam darah. Untuk penilaian kuantitatif antibodi digunakan koefisien positivitas "R". Ini menunjukkan kepadatan penanda yang dipelajari dalam materi biologi. Nilai referensi berkisar dari nol hingga 0,8. Kisaran 0,8-1 menunjukkan respon diagnostik yang dipertanyakan dan membutuhkan pemeriksaan lebih lanjut dari pasien. Hasil positif dianggap ketika unit R terlampaui.

Hepatitis C Antigen

Setidaknya 10 protein struktural dan non-struktural yang dikodekan oleh genom HCV dikenal saat ini. Protein struktural termasuk inti, menyelimuti 1 dan menyelimuti 2. Protein inti adalah protein nukleokapsid, sedangkan amplop 1 dan selubung 2 adalah glikoprotein dari kulit terluar virus. Protein p7 juga dikodekan dalam zona struktural, yang fungsinya tidak jelas, tetapi analogi dengan anggota lain dari keluarga Flaviviridae menunjukkan bahwa fungsinya terkait dengan pelepasan virion dari sel yang terinfeksi.
Protein ini dibelah oleh sel peptidase dari amplop 2, tetapi tidak dalam semua kasus, yang menyebabkan keberadaan amplop 2 dalam bentuk dua bentuk yang lebih dan kurang diperpanjang.

Wilayah non-struktural genom HCV mengkode 6 protein - NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A dan NS5B. Protein NS2 adalah proteinase virus yang bergantung pada logam. Protein NS4A bertindak sebagai efektor atau kofaktor untuk aktivitas proteolitik NS3 di NS4A / NS4B, NS4B / NS5A, NS5A / NS5B situs pemotongan poliprotein virus.

Saat ini, fragmen protein struktural dan non-struktural yang diperoleh oleh rekayasa genetika (protein rekombinan) atau dengan sintesis kimia, digunakan sebagai antigen dalam desain sistem uji enzim immunoassay. Generasi pertama sistem enzim immunoassay muncul di pasaran pada tahun 1989 dan didasarkan pada ELISA langsung. Sebagai imunosorben, fragmen dua protein, NS3 dan NS4, dilambangkan sebagai 5-1-1 dan C100-3, digunakan.

Bersamaan dengan itu, tes konfirmasi berdasarkan immunoblot dengan protein rekombinan (RIBA) dikembangkan. Sensitivitas sistem uji generasi pertama ini hanya 64% untuk ELISA dan 55% untuk imunoblot. Sistem uji generasi kedua muncul di pasar pada tahun 1991. Ketika antigen teradsorpsi pada fase padat, protein kapsid (fragmen c22-3) dan antigen dari wilayah nonstruktural NS3 (fragmen c200 dan s3S3) dan NS4 digunakan dalam sistem uji ini, yang memungkinkan untuk meningkatkan sensitivitas dan spesifisitas penelitian. Karena respon imun humoral terhadap antigen kapsid (protein struktural) lebih abnormal, heme berkurang menjadi protein non-struktural, periode dari infeksi menjadi serokonversi yang dapat dideteksi berkurang menjadi dua bulan.

Sistem uji imunoblot berbasis konfirmasi memungkinkan untuk mengidentifikasi antigen yang terlibat dalam reaksi. Hasil yang diperoleh dengan menggunakan sistem uji ini ditafsirkan sebagai positif hanya ketika antibodi dalam substrat yang diteliti bereaksi dengan setidaknya dua antigen, sedangkan di hadapan reaksi dengan hanya satu dari antigen, hasilnya dianggap tidak pasti. Ditemukan bahwa spesifisitas sistem uji generasi kedua tergantung pada sumber antigen. Pada tahun 1993, generasi ketiga sistem uji muncul di pasar. Selain antigen di atas, antigen juga digunakan dalam sistem uji ini, urutan asam amino yang sesuai dengan daerah imunodominan protein NS5.

Dalam sistem uji dari generasi pertama, kedua dan ketiga, baik peptida rekombinan atau sintetis digunakan sebagai antigen. Saat ini, juga dimungkinkan untuk sistem uji tunggal dari generasi keempat, di mana kombinasi peptida rekombinan dan sintetis digunakan sebagai imunosorben.

Pengalaman menggunakan sistem uji dari berbagai generasi di dunia sangat besar. Ditemukan bahwa jika menggunakan sistem uji generasi pertama atau kedua pada pasien dengan hepatitis C akut, antibodi terdeteksi pada 10-16, dan dalam beberapa kasus, 25-30 minggu sejak onset penyakit, maka diagnostik generasi ketiga memungkinkan mengurangi periode ini menjadi 2-3 minggu. Menurut data umum, sensitivitas sistem uji dari generasi pertama, kedua dan ketiga adalah 70-80%, 92-95% dan 97%, masing-masing.

Pada saat yang sama, menurut S. Colin, 2001, sensitivitas sistem tes generasi ketiga adalah 98,9% pada pasien dengan penyakit hati kronis dan 97,2% pada panel kontrol serum khusus. Pencapaian sensitivitas tinggi sistem tes imunoenzim generasi ke-3 dan ke-4 dikaitkan dengan beberapa masalah dalam memastikan spesifisitas penelitian, yang dalam beberapa kasus dapat menyebabkan hasil positif palsu. Dalam literatur ada bukti kemungkinan kesalahan dalam spesifisitas sistem tes ELISA 3. Mereka umum untuk semua sistem tes ELISA, termasuk sistem uji untuk diagnosis AIDS.

Hasil positif palsu mungkin disebabkan oleh peningkatan kadar gamma globulin dalam sampel (pasien ras Afrika, myeloma, faktor rheumatoid), penyakit hati (sirosis, kanker), penyakit autoimun (kolagenosis, hepatitis autoimun), infeksi virus lainnya (HIV, hepatitis B). ) dan penyimpanan serum jangka panjang dalam mengubah kondisi suhu. Setiap imunisasi juga dapat disertai dengan peningkatan frekuensi reaksi positif palsu. Tindakan yang saat ini direkomendasikan untuk menghilangkan masalah ini adalah sebagai berikut: a) mengatur ulang sampel dalam EFTS yang sama; b) deteksi berulang anti-HCV di IFTS lain; c) penggunaan tes konfirmasi berdasarkan ELISA dan imunoblot.

Namun, penggunaan metode yang diusulkan untuk mengkonfirmasikan hasil sering menyebabkan perbedaan dalam interpretasi akhir mereka, seperti yang ditunjukkan oleh penelitian oleh peneliti Rusia dan asing.

Saat ini, produsen IPT untuk mendeteksi anti-HCV mencapai sensitivitas tinggi atau karena deteksi antibodi yang lebih lengkap untuk NS3 atau antibodi terhadap inti antigen. Studi komparatif yang dilakukan pada berbagai kelompok risiko dan panel kontrol khusus menunjukkan bahwa sistem uji yang mendeteksi antibodi yang lebih baik terhadap NS3 ternyata lebih sensitif daripada sistem uji yang mendeteksi antibodi yang lebih baik terhadap antigen inti. Kepekaan mereka masing-masing, 99,9% dan 98,6%.

Penanda total dan interpretasi analisis untuk antibodi terhadap hepatitis C

Lesi virus hati saat ini sering dimanifestasikan dalam praktek gastroenterologists. Dan sang pemimpin tentu saja akan menjadi hepatitis C. Di antara mereka. Beralih ke tahap kronis, itu menyebabkan kerusakan signifikan pada sel-sel hati, mengganggu fungsi pencernaan dan penghalangnya.

Hepatitis C ditandai oleh arus yang lamban, periode yang panjang tanpa manifestasi dari gejala utama penyakit dan risiko komplikasi yang tinggi. Penyakit ini tidak mengeluarkan sendiri untuk waktu yang lama dan hanya dapat diungkapkan dengan tes untuk antibodi terhadap hepatitis C dan penanda lainnya.

Hepatosit (sel hati) dipengaruhi oleh virus, itu menyebabkan disfungsi dan kehancuran mereka. Secara bertahap, setelah melewati tahap kronisitas, penyakit ini menyebabkan kematian seseorang. Diagnosis tepat waktu pasien untuk antibodi hepatitis C mampu menghentikan perkembangan penyakit, meningkatkan kualitas dan harapan hidup pasien.

Virus hepatitis C pertama kali diisolasi pada akhir abad ke-20. Kedokteran saat ini membedakan enam variasi virus dan lebih dari seratus subtipe. Menentukan jenis mikroba dan subtipe pada manusia sangat penting, karena mereka menentukan jalannya penyakit dan, oleh karena itu, pendekatan untuk pengobatannya.

Dari saat virus pertama kali memasuki darah manusia, dari 2 hingga 20 minggu berlalu sebelum gejala pertama muncul. Dalam lebih dari empat perlima dari semua kasus, infeksi akut berkembang tanpa gejala. Dan hanya dalam satu dari lima kasus, pengembangan proses akut dengan gambaran klinis terang yang khas sesuai dengan semua aturan transfer jaundice adalah mungkin. Infeksi kronis mengakuisisi lebih dari separuh pasien, kemudian pindah ke cirrhosis hati.

Antibodi yang terdeteksi pada waktunya untuk virus hepatitis C mampu mendiagnosis infeksi pada tahap paling utama dan memberi pasien kesempatan untuk penyembuhan lengkap.

Apa antibodi terhadap hepatitis C?

Orang-orang yang tidak berhubungan dengan obat-obatan mungkin memiliki pertanyaan alami - antibodi hepatitis C, apa itu?

Virus penyakit ini dalam strukturnya mengandung sejumlah komponen protein. Ketika dicerna, protein-protein ini menyebabkan sistem kekebalan tubuh bereaksi dan antibodi terhadap hepatitis C terbentuk bagi mereka.Berbeda jenis antibodi diisolasi, tergantung pada jenis protein aslinya. Mereka ditentukan laboratorium dalam periode waktu yang berbeda dan mendiagnosis berbagai tahap penyakit.

Bagaimana tes antibodi anti-HCV dilakukan?

Untuk mendeteksi antibodi terhadap hepatitis C, seseorang diambil di laboratorium untuk mengambil darah vena. Penelitian ini nyaman karena tidak memerlukan persiapan sebelumnya, kecuali untuk tidak makan 8 jam sebelum prosedur. Dalam tabung uji steril, darah subjek disimpan, setelah metode enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), berdasarkan koneksi antigen-antibodi, imunoglobulin yang sesuai terdeteksi.

Indikasi untuk diagnosis:

  • gangguan hati, keluhan pasien;
  • peningkatan indikator fungsi hati dalam analisis biokimia - transaminase dan fraksi bilirubin;
  • pemeriksaan pra operasi;
  • perencanaan kehamilan;
  • data ultrasound yang meragukan, diagnosis organ rongga perut, khususnya hati.

Namun seringkali, antibodi hepatitis C ditemukan dalam darah secara tidak sengaja, ketika memeriksa wanita hamil atau operasi yang direncanakan. Bagi seseorang, informasi ini dalam banyak kasus mengejutkan. Namun jangan panik.

Ada sejumlah kasus di mana hasil diagnostik yang salah-negatif dan positif palsu mungkin. Oleh karena itu, setelah berkonsultasi dengan seorang spesialis, disarankan untuk mengulangi analisis yang dipertanyakan.

Jika antibodi terhadap hepatitis C terdeteksi, itu tidak sebanding dengan yang terburuk. Anda perlu mencari saran dari seorang spesialis dan melakukan pemeriksaan tambahan.

Jenis antibodi terhadap hepatitis C

Tergantung pada antigen di mana mereka terbentuk, antibodi untuk hepatitis C dibagi menjadi beberapa kelompok.

Anti-HCV IgG - antibodi G kelas untuk virus hepatitis C

Ini adalah jenis antibodi utama yang terdeteksi untuk mendiagnosis infeksi selama pemeriksaan awal pada pasien. "Penanda hepatitis C ini, apa itu?" Setiap pasien akan bertanya kepada dokter.

Jika antibodi terhadap hepatitis C ini positif, maka itu berarti bahwa sistem kekebalan tubuh telah menjumpai virus ini sebelumnya, dan bentuk penyakit yang lamban mungkin hadir tanpa gambaran klinis yang jelas. Pada saat pengambilan sampel, tidak ada replikasi aktif dari virus.

Deteksi data imunoglobulin dalam darah manusia adalah alasan untuk pemeriksaan tambahan (deteksi RNA patogen hepatitis C).

Anti-HCV inti IgM - kelas M antibodi terhadap protein nuklir HCV

Jenis penanda ini mulai menonjol segera setelah patogen memasuki tubuh manusia. Laboratorium dapat dilacak satu bulan setelah infeksi. Jika antibodi terhadap kelas M hepatitis C terdeteksi, fase akut didiagnosis. Jumlah antibodi ini meningkat pada saat melemahnya sistem kekebalan dan aktivasi virus selama proses kronis penyakit.

Dengan penurunan aktivitas patogen dan transisi penyakit ke bentuk kronis, jenis antibodi ini dapat berhenti didiagnosis dalam darah selama penelitian.

Total anti-HCV - antibodi total untuk hepatitis C (IgG dan IgM)

Dalam situasi praktis, sering disebut jenis penelitian ini. Total antibodi virus Hepatitis C adalah deteksi kedua kelas penanda, baik M dan G. Analisis ini menjadi informatif setelah akumulasi antibodi kelas pertama, yaitu 3-6 minggu setelah fakta infeksi. Dua bulan kemudian, rata-rata, setelah tanggal ini, imunoglobulin kelas G sedang aktif diproduksi. Mereka ditentukan dalam darah orang yang sakit sepanjang hidupnya atau sampai penghapusan virus.

Antibodi total untuk hepatitis C adalah metode universal untuk skrining utama penyakit satu bulan setelah infeksi seseorang.

Anti-HCV NS - antibodi terhadap protein non-struktural HCV

Penanda di atas milik senyawa protein struktural dari patogen hepatitis C. Tetapi ada kelas protein yang disebut non-struktural. Juga dimungkinkan untuk mendiagnosa penyakit pasien. Ini adalah grup NS3, NS4, NS5.

Antibodi ke elemen NS3 terdeteksi pada tahap pertama. Mereka mengkarakterisasi interaksi utama dengan patogen dan berfungsi sebagai indikator independen dari keberadaan infeksi. Pengawetan panjang titer ini dalam volume besar dapat menjadi indikator meningkatnya risiko infeksi menjadi kronis.

Antibodi terhadap unsur NS4 dan NS5 ditemukan pada periode penyakit selanjutnya. Yang pertama menunjukkan tingkat kerusakan hati, yang kedua - pada peluncuran mekanisme infeksi kronis. Penurunan titer dari kedua indikator akan menjadi tanda positif dari permulaan remisi.

Dalam prakteknya, keberadaan antibodi hepatitis C non-struktural dalam darah jarang diperiksa, karena ini secara signifikan meningkatkan biaya penelitian. Lebih sering, antibodi inti untuk hepatitis C digunakan untuk mempelajari keadaan hati.

Penanda lain dari hepatitis C

Dalam praktik medis, ada beberapa indikator lain yang menilai keberadaan virus hepatitis C pada seorang pasien.

HCV-RNA - RNA Virus Hepatitis C

Agen penyebab hepatitis C - RNA - mengandung, oleh karena itu, dimungkinkan oleh PCR-metode dengan transkripsi terbalik untuk melaksanakan deteksi gen patogen dalam darah atau biomaterial diambil dari biopsi hati.

Sistem uji ini sangat sensitif dan dapat mendeteksi bahkan satu partikel virus dalam materi.

Dengan cara ini adalah mungkin tidak hanya untuk mendiagnosis penyakit, tetapi juga untuk menentukan jenisnya, yang membantu mengembangkan rencana untuk pengobatan di masa depan.

Antibodi terhadap hepatitis C: analisis decoding

Jika seorang pasien telah menerima hasil pemeriksaan untuk mendeteksi hepatitis C oleh ELISA, dia mungkin bertanya-tanya - antibodi hepatitis C, apa itu? Dan apa yang mereka tunjukkan?

Dalam studi tentang biomaterial untuk hepatitis C, antibodi total biasanya tidak terdeteksi.

Pertimbangkan contoh tes ELISA untuk hepatitis C dan interpretasi mereka:

"HEPATITIS C VIRUS: antigen dari virus dan respon dari sistem kekebalan tubuh mikroorganisme bagi mereka Informasi-panduan metodis Novosibirsk UDC 616.36-002.14: 578.891] -078.33 Hepatitis C virus :. "

Virus HEPATITIS C:

antigen dan reaksi virus

pada mereka sistem kekebalan tubuh

Virus Hepatitis C: antigen dari virus dan respon dari sistem kekebalan tubuh dari mikroorganisme:

informasi dan petunjuk metodologis / L.I. Nikolaev.

- Novosibirsk: “Vector-Best”, 2009. 78 hal.

Panduan ini menetapkan pemahaman terkini tentang biologi molekuler dari virus hepatitis C (HCV), antigennya dan pertahanan kekebalan dari makroorganisme ketika terinfeksi dengan virus ini. Perbedaan imunitas humoral spesifik pada orang dengan hepatitis C akut dan kronis, pola perubahan dalam kandungan imunoglobulin antiviral selama infeksi akut dan kronis, serta kekhasan imunitas humoral spesifik pada anak dengan penanda infeksi HCV dipertimbangkan.

Manual ini ditujukan untuk karyawan lembaga penelitian biologi dan medis, untuk karyawan pusat medis dan diagnostik dan mahasiswa pelatihan pascasarjana dokter.

L.I. Nikolaeva - Doktor Ilmu Biologi, peneliti terkemuka dari Research Institute of Virology. D.I. Ivanovsky RAMS.

Diterbitkan dalam edisi penulis.

© Nikolaev, L.I., 2009 © JSC "Vector-Best", 2009

DAFTAR SINGKATAN

aco - residu asam amino (s) ALAT - alanine aminotransferase AIC - sel penyajian antigen ASAT - aspartat aminotransferase kDa - kilodalton LDL - low density lipoproteins VLDL - lipoprotein densitas sangat rendah MCA - antibodi monoklonal MHC - kompleks histokompatibilitas utama NTO - OGS wilayah tidak diterjemahkan - berhenti hepatitis C pertama RT-PCR - membalikkan HPV transkripsi polymerase chain reaction - psevdovirusnye partikel PCR - polymerase chain reaction CHC - hepatitis C kronis TCL - T-helper limfosit CTLs - T limfosit sitotoksik EPR - retirulum endoplasma

KONTEN

Bab 1. VIRUS HEPATITIS C

1.1. Organisasi genom virus

1.2. Struktur Virion

Bab 2. Antigen Utama dari VIRUS HEPATITIS C.

2.1. Struktur, fungsi dan epitop cangkang glikoprotein

2.2. Antigen nukleokapsid

2.3. Karakteristik protein NS2

2.4. Struktur, fungsi dan epitop protein NS3.

2.5. NS4a dan NS4b polypeptides dan determinannya. 35

2.6. Signifikansi biologis dan epitop dari protein NS5a dan NS5b

Bab 3. PERAN SISTEM KEKEBALAN DALAM PEMBATASAN INFEKSI HCV

3.1. Faktor utama dari sistem kekebalan tubuh yang mempengaruhi penghapusan virus pada fase akut infeksi. _

3.2. Peran tanggapan sel-T pada hepatitis C

3.3. Respons humoral terhadap antigen hepatitis C. 49 3.3.1. Antibodi spesifik pada fase akut infeksi. _ 3.3.2. Imunitas humoral spesifik dalam perjalanan alami hepatitis C kronis. 55.3.3. Kekebalan humoral HCV spesifik pada orang yang telah mengalami infeksi akut dengan pemulihan

3.3.4. Imunitas humoral spesifik pada anak-anak dengan penanda infeksi HCV

PENDAHULUAN

Saat ini, di Federasi Rusia, seperti di sebagian besar negara, ada situasi epidemiologi yang tidak menguntungkan mengenai hepatitis virus parenteral [1-3]. Diharapkan pada tahun 2015–2020 jumlah orang yang terinfeksi di seluruh dunia akan berlipat ganda [2, 3]. Sejak tahun 2001, di negara kita ada kecenderungan untuk menurunkan tingkat kejadian hepatitis C akut (GHS) [1, 4]. Setelah tahun 2004, penurunan mulai terjadi pada pendeteksian orang dengan hepatitis C kronis (CHC) [5, 6].

Namun, di antara anak-anak hingga tahun 2006 ada peningkatan jumlah pasien dengan hepatitis C kronis [1, 5, 6]. Menurut para ahli, 1,4-2,4% warga Federasi Rusia terinfeksi virus hepatitis C (HCV), dan mayoritas orang-orang ini sudah memiliki bentuk infeksi kronis [7, 8]. Untuk CHC ditandai dengan progresif saja, mengarah ke pembentukan sirosis hati (hingga 30%), karsinoma hepatoseluler primer (hingga 15%) dan manifestasi ekstrahepatik (hingga 74%) [9, 10].

Meskipun studi intensif infeksi HCV, belum mungkin untuk menetapkan penyebab seringnya perkembangan bentuk kronis infeksi, untuk mengidentifikasi fitur-fitur respon imun yang menyebabkan eliminasi alami virus pada fase akut infeksi, dan juga untuk menciptakan vaksin pencegahan. Telah diketahui bahwa antigen HCV mampu menginduksi respon sel B-dan T-sel, yang pada 15-25% orang dengan hepatitis C akut cukup untuk menghilangkan virus [2, 11]. Tetapi yang paling sering fase akut infeksi menjadi kronis terhadap respon imun adaptif yang lebih nyata. [12, 13].

Virus Hepatitis C adalah patogen unik yang mampu menghindari pengendalian kekebalan, menciptakan varian genetik dan antigen baru, menunda pembentukan respons T-helper dan T-killer pada hepatitis C akut dan menyebabkan infeksi ulang pada orang yang dipulihkan. Sebuah studi intensif infeksi HCV dimulai setelah identifikasi patogen pada tahun 1989 dan terutama mengejar tujuan utama - penciptaan vaksin pencegahan [14, 15]. Pada akhir tahun 1990-an, setelah upaya yang gagal untuk mengembangkan vaksin seperti itu berdasarkan protein amplop HCV rekombinan, fokus penelitian tentang kekebalan antiviral adalah pada respon sel-T spesifik.

Perlu dicatat bahwa studi tentang mekanisme kekebalan yang melindungi pada hepatitis C sebagian besar terhambat oleh kurangnya model laboratorium yang tersedia dari infeksi, virus hanya mempengaruhi manusia dan simpanse. Tapi, seperti yang ditunjukkan oleh A. Basset dan rekannya, simpanse yang terinfeksi virus memiliki bentuk infeksi yang lebih ringan, dan pemulihan terjadi lebih sering daripada pada manusia [16].

Panduan ini meringkas data terkini tentang antigen HCV dan membahas kemungkinan untuk pertahanan kekebalan tubuh manusia selama infeksi ini. Perhatian khusus diberikan pada respons humoral spesifik, karena dialah yang keluar dari bidang studi intensif. Sebagaimana dicatat oleh para peneliti asing, hal ini terutama disebabkan oleh kurangnya metode yang tersedia untuk menganalisis antibodi untuk memisahkan antigen (HCV) individual [17]. Sejak tahun 1998, sistem uji imunoferment telah diproduksi di negara kami untuk menganalisis imunoglobulin untuk antigen individu HCV, yang telah memungkinkan spesialis domestik untuk mendapatkan informasi berharga mengenai fitur respon humoral terhadap protein virus.

6 Bab 1. VIRUS HEPATITIS C

1.1. Organisasi Genom Virus Pada 1989-1990, berkat pengembangan metode genetik molekuler, kloning dan isolasi genom HCV, dan kemudian virus itu sendiri, keberadaan yang sebelumnya diperkirakan, menjadi mungkin [14, 15, 18, 19]. Karakteristik organisasi genom HCV memungkinkan untuk memasukkannya ke dalam keluarga Flaviviridae di genus baru Hepacivirus, yang anggotanya kemudian menjadi virus lain [15, 20, 21]. Genom HCV diwakili oleh RNA untai tunggal, yang memiliki polaritas positif, dan mengandung sekitar 9400-9600 residu nukleotida. Hal ini ditandai dengan bingkai bacaan terbuka yang unik, daerah yang tidak diterjemahkan pendek (UTR) 5 - 5 dan 3-terminal, dan daerah dengan tingkat mutasi yang tinggi [21, 22].

Bingkai pembacaan terbuka mengkodekan prekursor protein tunggal, yang disebut polyprotein, yang terdiri dari 3008–3037 residu asam amino (aco) [23]. Sebagai hasil dari pembelahan proteolitik co-dan pasca-translasi dari polyprotein dan pengolahan produk, struktural dan non-struktural protein terbentuk. Tata letak antigen virus di polyprotein, situs aksi protease dan tingkat homologi antara berbagai isolat virus disajikan pada Gambar. 1 [24].

Karena keragaman genetik HCV pada awal 1990-an, sulit untuk mengklasifikasikan isolatnya. Pada tahun 1994, pada Konferensi Internasional II tentang Hepatitis C dan Virus Terkait, perjanjian dibuat untuk mendasarkan klasifikasi virus pada wilayah genom yang mengkodekan protein NS5b [25]. Akibatnya, 6 genotipe dan sekitar 80 subtipe HCV diisolasi.

(5-NTO) * (3-NTO) 92% 81% 55% 65% 57% 70% 65% 66% 70% 26% Fig. 1. Skema lokasi antigen virus dalam polyprotein [24]. Situs aksi protease seluler ditunjukkan dengan tanda panah di atas, untuk protease serin HCV - dari bawah. Wilayah yang dibelah oleh protease virus NS2 / NS3 ditandai dengan tanda bintang.

Di bawah ini adalah persentase homologi antara isolat virus, dengan mempertimbangkan NTO.

Genotipe utama adalah homolog pada 65-70%, subtipe (subtipe) pada 77-80%, dan varian genetik dalam satu isolat pada 95-97%. Kemudian, pada tahun 2005, sekelompok ahli mengklarifikasi klasifikasi HCV [26]. Disarankan untuk mempertahankan istilah "genotipe" daripada "Clyde" yang diusulkan oleh beberapa peneliti. Saat mengetikkan isolat virus, wilayah genom inti / E1, NS5b harus dianalisis dan urutan nukleotida dari seluruh RNA virus harus ditentukan jika diduga rekombinasi [27]. Telah diusulkan untuk mengklasifikasikan semua isolat HCV yang diketahui sampai saat ini menjadi enam genotipe, dan mempertimbangkan genotipe 7–10 yang diperkenalkan oleh beberapa peneliti sebagai subtipe.

RNA HCV yang paling dilestarikan adalah 5-terminal NTO - sekitar 92% homologi [22]. Berkat wilayah konservatif ini, menjadi mungkin untuk mendeteksi RNA virus dalam berbagai isolat dengan metode RT-PCR (reverse transcription polymerase chain reaction) [28, 29]. Dalam organisme yang terinfeksi, HCV ada sebagai satu set genetis heterogen, tetapi varian terkait erat, yang disebut quasi-spesies, perbedaan dalam urutan nukleotida yang berjumlah beberapa persen [30].

Selama proses infeksi, virus ini mengalami tekanan kekebalan: beberapa varian HCV dihilangkan oleh sistem kekebalan inang, sementara yang lain muncul [31, 32]. Varian baru dari virus muncul karena tidak adanya RNA-polymerase RNA-polimerase HCV, mengoreksi aktivitas 3-5-exonuclease [33]. Oleh karena itu, kesalahan yang terjadi selama replikasi RNA virus tidak dihilangkan.

Sebagian besar perubahan dalam urutan nukleotida RNA HCV ditemukan di tempat yang disebut sinonim, mutasi di mana tidak mempengaruhi sifat biologis penting dari virus. Perbandingan situs sinonim memungkinkan Anda untuk mengatur divergensi varian virus yang cocok. Dengan demikian, dalam studi tentang isolat HCV yang terisolasi di berbagai wilayah, ditemukan bahwa penetrasi virus ke dalam populasi manusia mungkin terjadi sekitar seribu tahun yang lalu [34, 35].

Unsur pertama dari genom HCV, 5-terminal UTR, terdiri dari 341 residu nukleotida dan melakukan fungsi biologis yang penting. Wilayah ini menyediakan interaksi RNA virus dengan subunit 40S ribosom, membentuk struktur kompleks dari situs pengikatan, yang disebut dalam singkatan bahasa Inggris IRES (internal ribosome entry site) [36]. IRES HCV memiliki struktur spasial yang kompleks (Gambar 2) [37, 38].

- 480 60–40–43–5-500

Fig. 2. Skema struktur sekunder IRES dengan empat domain utama (I - IV), pseudo-node, main (1) dan tambahan (2) codon diberikan dengan sedikit modifikasi dari artikel D.M. Forton dkk. [38].

Setelah mengikat IRES dari HCV ke subunit 40S dari ribosom, pembentukan kompleks translasi aktif dan terjemahan genom virus dimulai melalui mekanisme independen topi [37, 39]. Untuk memulai terjemahan, kodon AUG pada posisi 342 digunakan (Gbr. 2). Telah ditetapkan bahwa interaksi RNA virus dan subunit 40S dari ribosom dalam yang terakhir mengarah ke perubahan konformasi kompleks, yang merupakan proses yang unik [40].

Untuk penerjemahan genom HCV, faktor inisiasi seluler (kanonik) biasa eIF2 dan eIF3 diperlukan. Karena kompleks translasi aktif terbentuk secara perlahan, tingkat translasi awal rendah, tetapi meningkat ketika rantai RNA plus berinteraksi dengan protein aktivator non-kanonis dari sel, seperti antigen La, heterogen ribonukleoprotein L, ribosomal protein rpS5 dan beberapa protein seluler tak dikenal lainnya [41–44 ].

Kemampuan IRES HCV untuk mengikat ribosom dapat menghambat beberapa protein seluler, peptida dan vitamin B12 [45-49].

RNA pendek yang melengkapi IRES, disebut short interfering RNA, mengikatnya dan menghentikan translasi genom virus [50]. Hal ini menunjukkan bahwa efek antivirus interferensi alfa, beta dan gamma juga muncul pada tingkat terjemahan yang dimediasi oleh IRES [51]. HCV telah ditemukan memiliki perbedaan spesifik jaringan dalam struktur IRES [38, 52, 53]. Ada kemungkinan bahwa ini adalah salah satu cara untuk memastikan persistensi virus dalam sel-sel banyak jaringan.

Dalam proses replikasi genom HCV, RNA terbentuk dengan polaritas negatif, yang disebut rantai negatif RNA. Ini tidak stabil dan dipecah oleh enzim seluler (hampir 60% dalam 30 menit) [54]. Dalam sel yang terinfeksi, rasio rantai plus dan minus RNA adalah 10: 1 [55]. Untuk replikasi yang efisien dari genom virus, protein seluler PTB (protein pengikat saluran polypyrimidine) yang mengikat saluran RNA polypyrimidine diperlukan [56]. Dalam percobaan model, ditemukan bahwa sekitar 1000 salinan rantai plus RNA dan sekitar 100 salinan rantai negatif RNA terbentuk dalam satu sel yang terinfeksi per hari [57].

Unsur terakhir dari genom, 3-terminal UTR, terlibat dalam inisiasi replikasi (tempat inisiasi terletak di rantai negatif RNA), dalam pengaturan penerjemahan dan stabilisasi RNA genomik [41, 59-61]. Dalam struktur UTR 3-terminal, ada tiga elemen:

1) bagian pendek dengan urutan variabel yang terdiri dari 40 residu nukleotida, 2) saluran poliuridin yang mengandung 36 atau lebih residu uridin, dan 3) wilayah konservatif unik X yang terdiri dari 98 nukleotida [60]. Wilayah X memiliki struktur sekunder yang kompleks di mana satu panjang dan dua jepit rambut pendek dibedakan [61]. Telah ditetapkan bahwa wilayah ini terlibat langsung dalam pembentukan kompleks replikatif, pengaturan inisiasi dan replikasi terjemahan [41, 62, 63].

1.2. Struktur virion Pada percobaan awal dengan penyaringan HCV melalui filter dengan diameter pori yang berbeda, ditunjukkan bahwa virion memiliki ukuran dari 30 hingga 60 nm, yang bertepatan dengan data analisis mikroskop elektron dari virus dalam sampel biologis [64, 65]. Pada awal 1990-an, partikel-partikel yang mengandung RNA diisolasi dari serum darah orang-orang dengan hepatitis C, yang, selama ultrasentrifugasi gradien, terkonsentrasi di lima zona dalam kisaran densitas 0,95-1,21 g / ml [66-68]. Masing-masing zona ini digunakan untuk menginfeksi simpanse [68]. Dan ternyata bahwa zona dengan kepadatan 0,95-1,10 g / ml memiliki infektivitas maksimum. Kepadatan yang sangat rendah dari partikel virus ini dijelaskan oleh asosiasi HCV dengan serum low density lipoproteins (LDL) dan kepadatan sangat rendah (VLDL) [19, 66].

Lipoprotein adalah partikel bola yang dibentuk oleh monolayer fosfolipid dengan inklusi kolesterol dan apolipoprotein B dan E, rongga internal partikel diisi dengan trigliserida [69]. Fungsi utama lipoprotein adalah pengiriman trigliserida dan kolesterol ke berbagai sel. Sintesis lipoprotein terjadi pada endoplasmic retirement (EPR) dari hepatosit, di mana mereka mungkin berinteraksi dengan amplop protein-lipid HCV, membentuk kompleks [70]. Situs-situs shell HCV yang bertanggung jawab untuk pembentukan kompleks virus dengan LDL / VLDL belum ditetapkan. Kompleks ini disebut partikel lipovirus. Virion dalam kompleks dilindungi dari antibodi penawar virus dan dapat menembus ke dalam hepatosit menggunakan reseptor untuk LDL [68]. Sekitar 75% lipoprotein yang bersirkulasi dalam darah kembali ke hepatosit melalui reseptor khusus untuk LDL; sisanya masuk ke hepatocytes secara berbeda. Telah ditetapkan bahwa sekitar 20% dari virion tidak terkait dengan lipoprotein serum [71].

Investigasi resistansi HCV terhadap pelarut organik, A.M. Prince dan rekannya menunjukkan bahwa virus tersebut memiliki membran protein lipid yang dibentuk oleh lipid sel inang dan protein permukaan dari virus [72]. Pada tahun-tahun berikutnya, struktur HCV disempurnakan menggunakan analisis elektron-mikroskopis resolusi tinggi dari biopsi hati pasien dengan hepatitis C dan virus mirip-virus buatan (HPV). HPV terbentuk setelah ekspresi fragmen genom HCV (disebut replikon) dalam berbagai vektor. Virus stomatitis vesikuler, virus vaccinia, dan baculovirus digunakan sebagai vektor [73-75]. Ketika urutan nukleotida yang mengkode protein amplop HCV dimasukkan dalam genom retrovirus (HIV atau virus leukemia tikus), partikel pseudovirus (HPV) diperoleh dalam amplop yang berisi protein E1 dan E2 dari HCV, dan semua elemen partikel lainnya adalah retroviral [76, 77]. ]. Penggunaan HPV memfasilitasi studi morfologi dan perakitan HCV, serta studi tentang sifat-sifat proteinnya. Secara khusus, dimensi virion ditentukan, diameternya adalah 50 nm, yang sesuai dengan data modern yang diperoleh dalam studi tentang virus asli yang diisolasi dari pasien dengan hepatitis C [78, 79].

Dalam ara. 3 menunjukkan mikrograf elektron HPV yang diperoleh menggunakan mikroskop elektron transmisi [79].

Fig. 3. Mikrograf elektron dengan kontras negatif HPV [79].

Di bagian kiri bawah, dengan perbesaran yang lebih tinggi, satu virion dengan protein permukaan menonjol berbentuk T diperlihatkan.

Di bawah amplop HCV terletak nukleokapsid, yang dibentuk oleh inti (inti) protein dan mengandung RNA virus (Gambar 4). Ukuran nukleokapsid, sebagaimana ditentukan oleh analisis mikroskopis elektron dari partikel virus yang tidak berbentuk, adalah 33–40 nm [74].

Sejauh ini, tidak mungkin untuk mengisolasi HCV dalam jumlah yang cukup untuk studi terperinci, baik dari orang sakit atau dari simpanse. Hal ini disebabkan oleh rendahnya kandungan virus, heterogenitasnya, serta kemampuan untuk membentuk kompleks dengan antibodi dan lipoprotein darah. Laporan pertama tentang budidaya HCV dalam kultur sel transplantasi dibuat oleh P.G. Deryabin dan rekan penulis pada tahun 1997 [81]. Pada tahun 2005, empat kelompok peneliti menerbitkan data eksperimen tentang ekspresi virus dalam kultur sel yang ditransplantasikan dengan produksi partikel virus infeksi [82-85].

Morfogenesis HCV dilakukan di membran dari pensiun endoplasma, vakuola Golgi dan sitoplasma sel. Protein struktural virus dibelah dari polyprotein oleh enzim seluler (peptidase sinyal dan peptidase peptida). Protein inti tetap pada permukaan sitoplasma EPR dan di vakuola lipid sitoplasma, dan protein amplop sebagian menembus ke rongga internal EPR.

Dalam retikulum endoplasma, protein E1 dan E2 membentuk proses yang kompleks dan mengalami, yang mungkin berakhir di vakuola sekretori Golgi. Nukleokapsid setelah pengemasan RNA ditutupi dengan cangkang, dan virus diekstrusi ke dalam tangki ESR. Berdasarkan hasil analisis spesimen biopsi hati pada pasien dengan CHCV V. Falcon dan rekan penulis menyarankan bahwa tahap akhir morfogenesis virus terjadi pada struktur vesikular vesikular seperti EPR [86]. Partikel virus yang terbentuk meninggalkan sel sebagai bagian dari vakuola sekretori [87].

Tingkat pembentukan virion pada pasien dengan infeksi HCV kronis dapat mencapai 1012 partikel per hari, dan waktu paruh virion dalam darah adalah sekitar 3 jam [88].

Bab 2. Antigen Utama dari Hepatitis VIRUS dengan protein HCV Mayor adalah protein amplop E1 dan E2, protein nukleokapsid dan nonstruktural NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, NS5b.

Selain mereka, polipeptida kecil juga ditularkan dari genom virus: peptida p7, protein F, dan polipeptida yang dipelajari dengan buruk dengan massa molekul sekitar 8 kDa [89].

Dua protein minor terakhir disintesis sebagai hasil pembacaan informasi genetik dari kodon inisiasi tambahan yang terletak di wilayah genom yang mengkodekan protein inti [22]. Telah ditetapkan bahwa sedikit polipeptida yang dipelajari dengan massa molekul sekitar 8 kDa dibaca dari kodon 2 (lihat Gambar 2). Pengaturan protein HCV dalam membran EPR ditunjukkan pada Gambar. 5

P7 peptida, juga disebut HCV viroporin, membentuk heptamer yang membentuk saluran kation-spesifik, yang signifikansi yang dalam biologi dari virus belum sepenuhnya dijelaskan [91]. Diasumsikan bahwa dia terlibat dalam tahap awal morfogenesis virus. Efek p7 peptida pada sifat infeksi HCV baru-baru ini telah ditunjukkan [92].

Protein F disintesis dengan menggeser kerangka baca kode genetik oleh satu residu nukleotida (kodon inisiasi baru dimulai dari residu nukleotida 341, lihat Gambar. 2) dan memiliki

Angka Rongga EPR. 5. Tata letak protein HCV dalam membran EPR diberikan dengan sedikit perubahan dari artikel oleh B. Lindenbach dan C.M. Padi [90].

urutan asam amino konservatif [93, 94]. Telah dihipotesiskan bahwa protein ini terlibat dalam pengembangan infeksi HCV persisten [94, 95]. Mungkin ada hubungan antara penampilan protein F dan steatosis hati pada hepatitis C kronis. Telah ditunjukkan bahwa antibodi terhadap protein ini hanya ditemukan pada 10% pasien dengan hepatitis C kronis, tetapi jika mereka mengembangkan steatosis hati, tingkat deteksi antibodi ini meningkat tiga kali lipat [96]. Saat ini, studi intensif fungsi biologis protein HCV kecil sedang berlangsung.

2.1. Struktur, fungsi dan epitop glikoprotein yang diselimuti Amplop protein E1 (aco 192–383) dan E2 (aco 384-746) adalah fragmen poliprotein yang terletak di belakang inti (inti) protein (lihat Gbr. 1) [97, 98]. Menurut analisis elektroforetik, massa molekul protein E1 adalah 31 kDa, E2 - 70 kDa. Kedua protein milik protein transmembran dan mengandung residu karbohidrat [97]. Fungsi utama dari protein ini

- interaksi dengan reseptor dan memastikan penetrasi genom virus ke dalam sitoplasma sel.

Biosintesis protein HCV dilakukan pada ribosom yang terkait dengan EPR. Berkat sinyal translokasi khusus, sebagian besar wilayah polyprotein yang berhubungan dengan protein E1 dan E2 memasuki rongga tangki EPR. Di sana, peptidase sinyal seluler membelah protein ini dari satu sama lain, serta dari protein inti [62, 97-99]. (Situs aksi peptidase ditunjukkan pada Gambar. 1.) Setelah itu, protein amplop HCV tetap terikat pada membran EPR karena daerah transmembran terlokalisasi di daerah COOH-terminal dari rantai polipeptida mereka [99, 100].

Proses kompleks pelipatan spasial, atau pelipatan, dari protein E1 dan E2 dimulai bersamaan dengan terjemahan dan selesai setelah itu. Tahapan utama dari pelipatan protein E1 dilakukan selama 1 jam dengan bantuan calincin protein selular pendamping, yang membentuk kompleks jangka pendek dengan itu [101, 102]. Dengan partisipasi calnexin, empat ikatan disulfida (S-S) terbentuk dari delapan residu sistein dari glikoprotein E1. Dalam satu jam lebih, struktur spasial glikoprotein E1 menstabilkan [103].

Lipat protein E2 lebih panjang (sekitar 4 jam) dibandingkan protein E1.

Jelas, ini karena adanya 18-20 residu sistein dalam molekul, yang dapat membentuk ikatan 9-10 disulfida, dan glikosilasi intensif protein E2 [104]. Peliputan spasial protein E2 terjadi dengan partisipasi calnexin dan chaperon yang belum diidentifikasi, serta protein E1 [103, 104].

Diasumsikan bahwa setelah selesai, 8–9 ikatan disulfida terbentuk dalam batas satu polipeptida dan satu ikatan S-S antara dua polipeptida E2 - E2 dalam protein E2-nya.

Kompleks protein cangkang E1 - E2 terbentuk tanpa adanya ikatan kovalen [103–105]. Stoikiometri kompleks ini belum ditetapkan, protein E2 mungkin merupakan komponen utama [104]. Protein lipat dan pembentukan kompleks glikoprotein shell tidak selalu terjadi dengan benar, protein E1 dan E2 yang dirakit secara salah, serta kompleksnya, ditemukan dalam tangki EPR dalam bentuk agregat molekul tinggi [105].

Di bawah aksi enzim seluler dari jaringan EPR, protein E1 dan E2 diglikosilasi, membentuk apa yang disebut chitobiose core [97].

Proses glikosilasi dimulai bersamaan dengan pelipatan protein dan berakhir di vakuola Aparatus Golgi. Glikosilasi memastikan lipatan spasial yang tepat, pembentukan struktur antigenik spesifik dan munculnya aktivitas biologis pada cangkang glikoprotein. Selain itu, setelah glikosilasi, protein E1 dan E2 dapat disekresikan dari sel dan lebih terlindungi dari enzim proteolitik tertentu dari sel.

Kedua glikoprotein HCV termasuk ke dalam protein transmembran tipe I, yang dicirikan oleh adanya ektodomain terminal NH2 (bagian dari protein yang terpapar dari bilayer lipid dari amplop virus) dan daerah transmembran terminal COOH. Dalam protein E1 dan E2, satu atau dua untai transmembran yang terlibat dalam pembentukan kompleks E1 - E2 dan mempertahankan glikoprotein dalam lapisan lipid bilayer dari amplop virus ditemukan [106-108].

Baru-baru ini, para ilmuwan telah membayar banyak perhatian untuk mencari glikoprotein HCV amplop dari peptida fusi (fusi peptida), yang menggabungkan bilayers lipid endosome dan virus. Untuk HCV, sebuah model telah diusulkan (yang telah dikonfirmasi sebagian) dari penetrasi ke dalam sel dengan analogi dengan karakteristik proses dari virus ensefalitis tick-borne. Menurut model ini, setelah kontak HCV dengan reseptor, kompleks virus-reseptor terbentuk, yang dalam bentuk vakuola endositosis menembus ke dalam sel (proses ini juga disebut endositosis yang dimediasi reseptor). Pada tahap berikutnya, vakuola endositosis menyatu dengan endosome (struktur vesikular sitoplasma sel), yang ditandai dengan nilai pH rendah. Di bawah aksi lingkungan asam endosome, glikoprotein permukaan HCV mengalami perubahan konformasi yang mengarah pada paparan dan penggabungan peptida fusi ke dalam membran endosomal. Proses ini memicu peleburan bilayer lipid dari virus dan membran endosome, yang berakhir dengan pelepasan HCV RNA ke dalam sitoplasma sel.

Sejauh ini, belum ditemukan di mana dari dua glikoprotein amplop HCV peptida fusi berada. Ada beberapa asumsi tentang lokalisasi dalam protein E1: di situs dengan residu asam amino 265–287, atau 272–281, atau 275–293 [107, 109]. Kesamaan ditemukan dalam struktur primer dari peptida putatif fusi HCV subtipe 1a (Aco 265-287) dengan peptida yang sama pada beberapa anggota famili Flaviviridae (Gambar 6) [109].

Dalam glikoprotein E1 HCV, empat situs N-glikosilasi telah diidentifikasi: ini adalah residu aspartat pada posisi 196, 209, 234, dan 305 [110-112]. Dengan menggunakan metode mutasi titik di wilayah RNA virus yang mengkodekan protein E1, adalah mungkin untuk menunjukkan bahwa hilangnya situs glikosilasi pada posisi 209 dan 234 tidak mempengaruhi pembentukan kompleks E1-E2 [110, 113]. Residu Oligosaccharide

Fig. 6. Struktur utama dari fusi peptida pada anggota individu dari keluarga Flaviviridae [109].

TBE - virus ensefalitis tick-borne, HLV - virus demam kuning, WNE - virus ensefalitis Jepang, VDEN - virus dengue, KUNV - virus Kunyan, VNV - virus West Nile. Residu asam amino yang umum dengan HCV (2 glisin dan 2 sistein) digarisbawahi, residu asam amino yang serupa dalam sifat fisikokimia mereka disoroti dalam cetak miring.

pada posisi 196 dan 305 diperlukan untuk pelipatan spasial yang tepat dari protein E1, serta untuk pembentukan kompleks glikoprotein E1 - E2. Selain itu, telah ditunjukkan bahwa residu karbohidrat pada posisi 196 dan 209 dari glikoprotein E1 diperlukan untuk menjaga infektivitas virus [112].

Dalam ara. Gambar 7 menunjukkan model hipotetis dari pelipatan spasial protein E1, dihitung berdasarkan analisis proteomik, simulasi komputer dan analisis komparatif dengan protein amplop E dari ensefalitis virus tick-borne.

Rantai oligosakarida dari HCV glikoprotein paling sering dibentuk oleh 6–9 residu mannose yang melekat pada dua residu N-acetylglucosamine [114, 115]. Hanya protein E2 memiliki tipe oligosakarida yang lebih kompleks dengan jumlah residu mannose yang lebih sedikit, yang sebagian menggantikan fucose, dan residu N-acetylglucosamine berada di posisi terminal rantai oligosakarida [115].

Dalam glikoprotein E2, 11 situs glikosilasi ditemukan untuk residu aspartat pada posisi 417 (1), 423 (2), 430 (3), 448 (4), 476 (5), 532 (6), 540 (7), 556 (8 ), 576 (9), 623 (10) dan 645 (11) [111, 112, 115].

Itu menunjukkan bahwa kompleks glikoprotein E1 - E2 tidak terbentuk jika

Fig. 7. Skema perkiraan struktur spasial protein E1 disajikan dalam modifikasi cahaya dari R.F. Garry dan S. Dash [107].

Legenda: harness - rantai polipeptida, silinder - alpha helix, panah - struktur beta, trisula - rantai oligosakarida, segmen hitam - ikatan disulfida.

tidak ada rantai oligosakarida pada posisi 10 protein HCV E2.

Virus kehilangan infektivitasnya jika glikoprotein E2 tidak mengandung residu karbohidrat pada posisi 1, 2, 4, 8, 10, dan 11 [111]. Selain itu, ditemukan bahwa rantai oligosakarida pada posisi 1, 6 dan 11 terlibat dalam pembentukan epitop di mana antibodi penetralisir terbentuk [108, 116].

Subtipe 1a dan 3a virus telah ditemukan berbeda dalam jumlah rantai oligosakarida dalam amplop protein [117]. Dalam glikoprotein E2, berbeda dengan protein E1, ada residu oligosakarida modifikasi pada posisi 423 dan 430 [115, 116].

Glikoprotein E2 kurang dapat dipelajari dengan metode fisika-kimia untuk menganalisis struktur protein, terutama karena banyaknya residu karbohidrat. Kelimpahan rantai oligosakarida di E2 glikoprotein membuatnya sulit untuk mendapatkan kristal protein untuk analisis difraksi sinar-X dan untuk melakukan resonansi magnetik nuklir. Oleh karena itu, model struktur sekunder dibuat untuk bentuk singkat (ektodomain) dari protein E2 menggunakan program komputer yang memprediksi pelipatan protein dan analisis komparatif dari protein cangkang dari keluarga Flaviviridae sudah dipelajari [112]. Ektodomain adalah fragmen dari E2 glikoprotein (aco 384-660) tanpa bagian transmembrannya, yang memiliki banyak sifat biologis yang melekat pada protein E2 ukuran penuh. Ini dapat membentuk kompleks dengan glikoprotein E1, berinteraksi dengan antibodi monoklonal untuk epitop konformasi protein E2, serta dengan heparinsulfat dan beberapa reseptor seluler.

Dalam model spasial dari ectodomain dari glikoprotein E2 yang diusulkan oleh A.T. Yagnik dan rekan-penulis mengungkapkan kandungan rendah elemen struktur sekunder (sekitar 37%) dan prevalensi situs yang tidak teratur [113]. Unsur-unsur struktur sekunder diwakili terutama oleh bagian beta-dilipat dan beberapa fragmen alpha-heliks pendek. Ini adalah yang pertama dan sejauh ini satu-satunya model glikoprotein E2, yang jelas mencerminkan struktur sekunder nyata dengan beberapa perkiraan. Mengingat kompleksitas dan ambiguitas model ini, tidak jelas diwakili.

Salah satu fitur utama dari struktur utama protein E2 adalah adanya bagian dengan urutan asam amino non-konstan, yang disebut variabel dan hypervariable [118, 119]. Tiga situs dengan frekuensi substitusi asam amino yang sangat tinggi ditemukan pada protein E2, ini adalah daerah hipervariabel (HWR). HVR pertama dilokalisasi di bagian NH2-terminal protein E2 di situs dengan residu asam amino 384-411, HWR kedua - di lokasi dengan residu 474-482 dan yang ketiga, baru-baru ini ditemukan, di situs dengan residu 431-466 atau 434–450 [120– 122].

Telah ditetapkan bahwa HWR pertama, meskipun frekuensi substitusi asam amino tinggi, selalu mempertahankan muatan positif total dan profil hidrofilisitas / hidrofobisitas yang stabil.

Selain itu, empat residu asam amino pada posisi 385, 389, 406 dan 409 sangat konservatif, yaitu. mereka sangat umum pada isolat HCV yang diteliti [123, 124]. Seluruh variasi varian sekuens asam amino dari HWR pertama dapat direduksi menjadi urutan konsensus, yang tersusun dari residu asam amino yang paling umum di masing-masing dari 27 posisi (384–411) dari bagian protein E2 ini [124, 125]. Peran biologis dari HVR pertama adalah untuk menyediakan tahap awal serapan HCV pada permukaan sel dan untuk menyajikan "target geser" ke sistem kekebalan, yang terbentuk dengan terus-menerus mengubah varian antigenik baru dari wilayah protein E2 [31, 123, 126].

Ada bukti bahwa HVR kedua dan ketiga terlibat dalam pengikatan HCV ke reseptor sel [121, 127].

Karena variabilitas asam amino dari ketiga daerah hipervariabel dari glikoprotein E2, yang disebut varian pelarian virus terbentuk, yaitu. mereka yang saat ini tidak ada respon imun.

Fitur lain dari protein shell E2 adalah adanya situs rantai polipeptida yang mirip dengan protein lain.

Fenomena ini disebut mimikri molekuler. Dengan demikian, dua belas residu asam amino konservatif (posisi 660-671) dari protein E2 membentuk domain PEHD identik dengan situs fosforilasi dalam faktor inisiasi translasi ribosom eIF2a [128]. Karena kesamaan ini, HCV dapat menghentikan efek antivirus IFN-alpha. Setelah aktivasi interferon-alfa, protein kinase R harus memfosforilasi faktor eIF2a, yang pada gilirannya mengarah pada penghentian penerjemahan RNA HCV. Tetapi protein E2, menggunakan domain RephD, berinteraksi dengan protein kinase R bukan faktor eIF2a, dan biosintesis protein virus berlanjut [129].

Di bagian NH2-terminal protein E2, mimikri molekuler ditemukan dengan area rantai imunoglobulin ringan dan berat dan dengan reseptor sel-T [118]. Hal ini diyakini bahwa kesamaan struktural ini mungkin menjadi penyebab perkembangan gangguan autoimun pada pasien yang terinfeksi HCV, seperti mixed cryoglobulinemia tipe II dan limfoma non-Hodgkin sel B [130].

Seperti disebutkan di atas, protein amplop HCV menyediakan interaksi virus dengan reseptor seluler. Telah ditetapkan bahwa residu oligosakarida dari glikoprotein yang terbungkus ini dapat memainkan peran kunci dalam pengikatan virus ke reseptor potensinya seperti DC-SIGN (CD209), L-SIGN (CD209L) dan reseptor asialoglikoprotein [117, 131, 132]. Dua reseptor potensial pertama adalah lectin tipe C dan berfungsi sebagai molekul perekat permukaan yang menyediakan kontak seluler antara dendritik, sel endotel dan T-sel. Reseptor L-SIGN ada di permukaan sel endotel sinusoid dari hati dan kelenjar getah bening, dan DC-SIGN ada di permukaan sel dendritik. Reseptor-reseptor ini mengandung suatu wilayah pengakuan-karbohidrat khusus yang tergantung pada kalsium dari CRD (domain pengenalan karbohidrat), yang dapat berikatan dengan residu karbohidrat dari protein E1 dan E2 [117, 131]. Karena reseptor DC-SIGN dan L-SIGN tidak ditemukan di hepatosit, mereka tidak dapat dianggap sebagai target utama HCV. Reseptor-reseptor ini menangkap, mengumpulkan virus dan mengirimkannya ke sel-T dan, mungkin, ke hepatosit.

Reseptor asialoglycoprotein hadir di permukaan sel-sel hati dan memastikan penetrasi glikoprotein ke dalamnya, yang tidak memiliki residu asam sialic pada akhir rantai karbohidrat. Reseptor ini secara khusus terkait dengan protein E1 dan E2 rekombinan, diperoleh dengan mengekspresikan fragmen HCV RNA yang sesuai pada sel serangga [132].

Telah ditetapkan bahwa protein E2 rekombinan berinteraksi dengan reseptor virus potensial lainnya (atau co-receptor), transmembran protein CD81 [133]. Reseptor ini hadir di permukaan sebagian besar sel (kecuali erythro dan trombosit) dan terlibat dalam fungsi seluler yang terkait dengan adhesi, motilitas, aktivasi metabolisme dan transformasi. CD81 milik kelompok protein tetraspanin dan memiliki struktur karakteristik: 4 untai transmembran dan loop ekstraseluler besar dan kecil. The loop ekstraseluler besar CD81 telah terbukti mengikat khusus untuk protein virus rekombinan E2 [133].

Dalam model A.T. Yagnik dan rekan penulis dalam interaksi ini berpartisipasi dua area permukaan protein E2 dengan aco 474-494 dan 522-551 [112]. Namun, dalam studi selanjutnya ditemukan bahwa residu asam amino dari protein E2 pada posisi 420, 527, 530 dan 535 bersentuhan dengan loop besar CD81 [134].

Percobaan dengan HPV, HPV dan virus asli dari serum pasien dengan CHC mengkonfirmasi bahwa CD81 terlibat dalam proses penetrasi HCV ke dalam sel, tetapi selain itu, beberapa protein yang merangsang endositosis lainnya diperlukan [77, 78, 134]. Dengan CD81 dan protein ini, virion yang tidak terkait dengan lipoprotein akan memasuki sel, karena kontak dari glikoprotein virus E2 dan CD81 diperlukan. Telah diketahui bahwa kandungan virion tersebut sekitar 20% (lihat bagian 1.2). Virion yang tidak terkait dengan lipoprotein dapat memasuki sel di sepanjang jalur ini, karena pembentukan kompleks HCV dengan mereka ternyata mencegah kontak glikoprotein E2 dengan reseptor CD81.

Hingga 80% HCV ditemukan di tubuh orang yang terinfeksi dalam bentuk kompleks dengan lipoprotein (ini disebut partikel lipovirus). Partikel-partikel ini memasuki sel menggunakan reseptor untuk LDL (lihat bagian 1.2) dan reseptor SR-BI lainnya (juga dikenal sebagai Cla-1) [126]. Reseptor SR-BI ditemukan di permukaan banyak sel, tetapi kandungan tertinggi ditemukan di hati dan jaringan steroidogenik. Fungsi utama dari reseptor ini adalah untuk memberikan lipid yang membentuk lipoprotein densitas tinggi ke dalam sel. Reseptor SR-BI mengacu pada protein transmembran. Ini memiliki dua untai membran, loop ekstraseluler besar dan dua situs sitoplasma pendek di NH2 dan daerah terminal COOH [135]. Telah ditetapkan bahwa HWR pertama dari protein E2 rekombinan, HPV, dan virus yang diperoleh dari kultur sel dapat dikaitkan dengan reseptor ini [136-138]. Namun, HCV dari serum orang dengan hepatitis C, berinteraksi dengan reseptor SR-BI tanpa partisipasi protein HWR dan E2 pertama [118].

Untuk menjelaskan fenomena ini, telah disarankan bahwa virus memasuki sel menggunakan kompleks reseptor multikomponen yang dibentuk oleh CD81 - SR-BI [77, 138].

Diketahui bahwa rantai karbohidrat yang bermuatan negatif dari glikoprotein permukaan sel dapat berfungsi sebagai situs pengikatan utama untuk berbagai virus [139]. Karena proses ini, konten virus pada permukaan sel meningkat dan probabilitas interaksinya dengan reseptor spesifik meningkat. Percobaan pada pengikatan HCV ke kultur sel hepatom telah menunjukkan bahwa proses ini dapat diblokir oleh heparin dan suramin, yang memiliki muatan negatif [140]. Situs yang mengikat heparin secara spesifik dianggap terlokalisir dalam HVR pertama glikoprotein E2 dan / atau di zona dengan AKO 559-614, di mana kandungan tinggi residu asam amino bermuatan positif terdeteksi [112, 126]. Namun, dalam percobaan dengan partikel HCV pseudovirus, itu tidak mungkin untuk mendeteksi interaksi protein E2 dengan heparin [141]. Tentunya, keterlibatan glukosaminoglikan dalam proses kompleks masuknya HCV ke dalam sel membutuhkan penelitian lebih lanjut.

Seperti yang ditunjukkan oleh penelitian dalam dekade terakhir, HCV memiliki tropisme seluler yang luas. Virus bereplikasi dalam sel hepatosit, perifer dan asites mononuklear, limfosit dan monosit [142-144], sel dendritik [52, 145], sel progenitor hematopoietik [146], mikroglia [38], cardiomyocytes [147], epitel usus [ 148], osteoblas [149] dan folikel-folikel b-sel kelenjar getah bening [150]. Ini mungkin mengapa ada lebih dari satu reseptor untuk HCV.

Banyak perhatian dalam studi protein shell diberikan pada analisis sifat antigenik dan imunogeniknya, karena informasi ini diperlukan untuk pengembangan vaksin hepatitis C.

Telah ditetapkan bahwa glikoprotein E1 dan E2 memiliki imunogenisitas tinggi. Dengan demikian, imunisasi simpanse dengan protein amplop rekombinan menghasilkan antibodi spesifik untuk protein ini dengan titer 1/819200 [15]. Namun, dengan perjalanan alami hepatitis C akut dan kronis pada manusia, respon humoral terhadap E1 dan E2 glikoprotein virus jauh lebih lemah.

Data yang dipublikasikan pada identifikasi linear B-epitop pada protein E1 dan E2 disajikan pada Tabel. 1. Untuk analisis epitop ini, pemindaian peptida, tampilan fag, dan antibodi monoklonal digunakan. Metode pemindaian peptida didasarkan pada penggunaan peptida sintetis yang membentang seluruh rangkaian asam amino protein dan menentukan imunoreaktivitasnya, yaitu. kemampuan untuk berinteraksi dengan antibodi dari pasien dengan hepatitis C. Untuk pertama kalinya, studi tentang protein amplop HCV ini dilakukan di Chiron Corporation (AS) [151]. Kemudian, pada tahun 1997, hasil pemindaian peptida glikoprotein E1 dan E2 diterbitkan, di mana

serum unik dari wanita yang terinfeksi 17 tahun yang lalu dengan satu isolat HCV yang terkontaminasi obat imunoglobulin anti-D digunakan [152].

Terima kasih atas upaya tiga tim peneliti yang dipimpin oleh J. Dubuisson, M. Flint dan A.H. Patel, bank antibodi monoklonal murine dan manusia (MCA) untuk HCV diciptakan, yang memungkinkan untuk mengidentifikasi beberapa epitop B linear dan konformasi dari amplop protein E1 dan E2 [79, 109, 153-155].

Dalam ara. 8 menunjukkan tata letak B-epitop di glikoprotein E2, diidentifikasi oleh ICA.

Yang menarik adalah B-epitop, pengikatan antibodi yang menyebabkan netralisasi virus. Seperti penetralisir epitop terdeteksi dalam HWR pertama dari protein E2 [156].

Epitop lain yang menetralkan pengikatan virus ke sel (yang disebut NOB epitop dari netralisasi pengikatan) memiliki

Fig. 8. Lokasi B-epitop diidentifikasi menggunakan ICA pada protein E2.

Skema ini diberikan dengan sedikit perubahan dalam publikasi R.F. Clayton dkk. [79] dan A.M. Owsianka dkk. [155].

Di bagian atas, persegi panjang menandai ICA, mengenali ektodomain protein E2, protein E2 ukuran penuh dalam kombinasi dengan protein E1 dan E2 dalam komposisi HPV. Bagian bawah menunjukkan ICA berinteraksi dengan ektodomain protein E2 atau dengan protein E2 ukuran penuh dalam kombinasi dengan protein E1. Dalam warna hitam, ICA terisolasi yang menghambat pengikatan CD81 ectodomain E2, protein E2 lengkap dalam kombinasi dengan E1 dan HPV. ICA yang menghambat pengikatan HPV ke CD81 ditandai dengan warna abu-abu.

struktur konformasi, dalam formasi yang, menurut asumsi dari satu kelompok penulis, residu asam amino dari urutan 406-644 dari protein E2 [76, 156, 157] berpartisipasi, dan, menurut yang lain, residu dari urutan 414-443 dan 490–519 [158] ].

Hal ini menunjukkan bahwa konformasi B-epitop yang lebih kompleks, yang tidak memiliki sifat penetral, dapat dibentuk oleh residu asam amino dari 3 lokasi:

297–306 protein E1, 480–494 dan 613–621 protein E2 [167].

Dalam E1 dan E2 glikoprotein, epitop T-helper (CD4 +) dan T-killer (CD8 +) telah diidentifikasi (Tabel 2).

Saat ini, studi tentang lokalisasi dan struktur epitop B dan T protein amplop HCV sedang berlangsung. Informasi tentang topik ini dapat ditemukan di situs web Los Alamos National Laboratory (AS): http://hcv.lanl.gov.

* Jika peptida beranggota 20 digunakan untuk menentukan epitop, maka tidak ada lokalisasi yang tepat.

2.2. Antigen nukleokapsid Skema lokalisasi protein nukleokapsid (sinonim: inti, inti) dalam polyprotein ditunjukkan pada gambar. 1. Protein ini terlibat dalam tahap penting morfogenesis virus: membentuk nukleokapsid virus, memulai pengemasan RNA HCV dan perakitan amplop virus [74, 178, 179].

Protein inti mungkin memiliki fungsi biologis lainnya. Dengan demikian, dalam berbagai percobaan model ditunjukkan bahwa ia berinteraksi dengan protein regulator dan beberapa elemen struktural sel: dengan protein p53 [179], reseptor pertama untuk tumor necrosis factor [180], reseptor limfotoxin-beta [181], faktor transkripsi LZIP [182] ], STAT3 protein (yang meningkatkan sinyal transkripsi) [183], ribonukleoprotein nuklir heterogen K [184], helicase DDX3 [185], trigliserida sitoplasma vesikel [186], mitokondria [187], cytokeratins sel [188]. Corbeloc diyakini terlibat dalam pengembangan steatosis dan hepatocarcinogenesis pada pasien dengan hepatitis C kronis [179, 186].

Protein nukleokapsid terbentuk pertama di antara semua protein virus dalam proses biosintesis, itu dibelah dari polyprotein menggunakan peptidase sinyal sel [190]. Dalam hidrolisis proteolitik akhir dari protein inti, peptida-peptidase SPP yang baru-baru ini ditemukan berpartisipasi, melakukan pembelahan intramembran yang tidak biasa [189, 190].

Pengolahan protein nukleokapsid disertai dengan transisi bentuk p23 (193 ako) menjadi p21 (173 aco) dan fosforilasi residu serin pada kelompok OH [189]. Area yang dibelah (174-193 aco) membawa sinyal translokasi, karena bagian NH2-terminal dari protein E1 jatuh di dalam tangki EPR [191].

Bentuk matang dari protein inti memiliki struktur amphipathic yang terdefinisi dengan baik: sebuah terminal NH2 hidrofilik dan wilayah terminal COOH-hidrofobik [192]. Dengan demikian, domain D1 (hidrofilik) dan domain D2 (hidrofobik) diisolasi dalam protein. Struktur serupa adalah karakteristik protein nukleokapsid dari keluarga Flaviviridae. Kadang-kadang, domain ketiga (tengah), yang memiliki kandungan residu tryptophan yang sangat tinggi, juga terisolasi dalam protein inti [46].

Domain hidrofilik D1 berisi situs pengikatan RNA, epitop B konservatif utama, dan fragmen yang bertanggung jawab untuk pembentukan dimer protein inti [192]. Bentuk aktif dari protein nukleokapsid dibentuk oleh dua rantai polipeptida, yaitu. Protein inti adalah dimer yang didominasi oleh struktur struktural alpha-helix. Dalam domain D2 hidrofobik, yang menyediakan hubungan dengan membran dan inklusi lipid dari sitoplasma, helipatik alpha-heliks dengan permukaan hidrofilik dan hidrofobik ditemukan.

Di antara semua protein virus, protein inti dicirikan oleh kandungan tertinggi dari zona konservatif dalam struktur primer [193].

Tata letak daerah fungsional utama utama dari protein nukleokapsid ditunjukkan pada Gambar. 9. Selain zona penting ini, orang harus mencatat wilayah protein inti dengan residu asam amino 72-91, yang berinteraksi dengan protein amplop E1 [194], wilayah dengan residu 69-104, yang diperlukan untuk mempertahankan infektivitas dalam HCV [195], zona residual 65 –72, yang mungkin berhubungan dengan peptida p7 pada tahap awal morfogenesis virus [195].

Menurut data mikroskop elektron, protein inti dilokalisasi dalam sel pada membran EPR, pada vesikel lipid di sitoplasma, dan juga di nukleus. Pengalihan protein inti ke dalam inti sel dicapai oleh protein transpor sel NLS biparnine, yang berinteraksi dengan urutan sinyal khusus dalam protein inti [196].

Studi tentang nukleokapsid asli dari serum dan analognya yang diperoleh dengan menggunakan replikasi HCV menunjukkan bahwa terlepas dari asalnya, mereka memiliki koefisien sedimentasi sekitar 100 S, kepadatan mengambang dalam gradien

Fig. 9. Tata letak situs fungsional utama penting dalam protein nukleokapsid diberikan dengan sedikit modifikasi dari C.L. Murray dkk. [195].

Di bagian bawah digit ditandai jumlah residu asam amino.

caesium adalah 1,28 g / ml dan diameter 33-46 nm, ditentukan menggunakan mikroskop transmisi [197, 198]. Menurut data analisis mikroskopis elektron dari spesimen biopsi hati orang dengan hepatitis C kronis, telah ditetapkan bahwa ukuran nukleokapsid virus dalam kasus ini berfluktuasi lebih intensif: dari 28 hingga 48 nm [198].

Protein inti adalah salah satu antigen yang paling imunogenik dari HCV. Data pada B-dan T-epitop diberikan dalam tabel. 3 dan 4.

Perlu dicatat bahwa B-epitop dari protein nukleokapsid terkonsentrasi terutama dalam domain hidrofilik dan daerah yang dilestarikan.

2.3. Karakterisasi protein NS2 Protein NS2 adalah protein HCV non-struktural, terletak di polyprotein setelah p7 peptida (lihat Gambar 1). Protein NS2 memiliki berat molekul sekitar 23 kDa, tidak mengandung residu karbohidrat, dan berhubungan dengan membran EPR [206, 207]. Topografi yang tepat dari protein dalam membran belum ditetapkan, diasumsikan bahwa ia membentuk 3 untai transmembran (lihat Gambar. 5) [90]. Protein NS2 sulit larut, sehingga sulit untuk dipelajari.

Fungsi biologis utama dari protein NS2 adalah eliminasi protease serin HCV. Untuk pelaksanaannya, protein NS2 membentuk kompleks dengan situs polyprotein yang berhubungan dengan protein NS3 [206, 208].

"Perpustakaan Ilmiah Universitas Federal Kazan (wilayah Volga). N.I. Lobachevsky, Entri Buku Baru ke National Bank of the Fund dari 27 Juni hingga 4 September 2015. Kazan Direkam dalam format RUSMARC menggunakan Ruslan AIS. Materi disusun dalam urutan sistematis oleh cabang-cabang pengetahuan, dalam beberapa bagian - dalam alfabet penulis dan judul. Sampul, abstrak dan isi publikasi dapat ditemukan dalam katalog elektronik. Judul yang tidak diketahui Bahan dari Konferensi All-Rusia. "

“KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN ILMU DARI FEDERASI RUSIA FIA Lembaga Federal Negara Pendidikan Tinggi Profesional“ UNIVERSITAS NEGARA TYUMEN ”Institut Biologi Departemen Ekologi dan Genetika O.N. Zhigileva EKOLOGI PARASITOLOGI Kompleks pendidikan dan metodis. Program kerja untuk siswa ke arah pelatihan 06.03.01 Biologi (tingkat sarjana), pelatihan profil "Bioecology", pendidikan penuh waktu Tyumen Negara. "

“RUSIA FEDERASI KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN ILMU Negara Institusi Pendidikan Perguruan Tinggi Pendidikan Tinggi UNIVERSITAS NEGARA TINGGI Lembaga Jurusan Biologi Zoologi dan Ekologi Evolusi Hewan A.V. Tolstikov, V.A. ENTOMOLOGI Stolbov Kompleks pendidikan dan metodis. Program kerja untuk siswa ke arah pelatihan 35.03.10 Arsitektur lansekap, profil pelatihan Tanaman hias tumbuh dan pembibitan, pendidikan Tyumen waktu-penuh. "

“KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN ILMU FEDERASI RUSIA FIA Lembaga Federal Negara Pendidikan Tinggi Profesional“ UNIVERSITAS NEGARA TYUMEN ”Institut Biologi Departemen Anatomi dan Fisiologi Manusia dan Hewan Lepunova O.N. ANATOMI MANUSIA DAN MORFOLOGI Kompleks pendidikan-metodis. Program kerja untuk siswa 06.03.01 bidang "Biologi", profil: botani, zoologi, fisiologi, genetika, bioekologi, biokimia; bentuk pendidikan. "

"PENDIDIKAN MUNICIPAL" KABUPATEN BEGANITSKY "INSTITUSI PENDIDIKAN ANGGARAN MUNIKIPAL" SEKOLAH BERGANIKA SEKUNDER "Setuju pada Persetujuan dewan metodologis dari direktur sekolah Protokol No. 1 dari 27 Agustus 2014 _ / S.К. Mikheev Orde No. 71 dari 29 Agustus 201 PROGRAM KERJA TUJUAN TUJUAN BIOLOGI dasar pendidikan umum, kelas 6 untuk tahun ajaran 2014-2015 Guru Vasilyeva Irina Bezhanitsy 2014 1. Program kerja klarifikasi dalam biologi sesuai dengan yang Federal. "

“DEPARTEMEN PERTANIAN FEDERASI RUSIA FIA Institusi Pendidikan Negara Bagian Federal Pendidikan Tinggi Profesional“ UNIVERSITAS AGRARIA KUBAN NEGERI ”Departemen Mikrobiologi, Epizootologi dan Virologi METODOLOGI INSTRUKSI pada subjek: pelatihan 36,06,01 Teknologi kedokteran hewan dan ternak, fokus: “Mikrobiologi veteriner, virologi. "

“KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN ILMU WILAYAH KALUGA Lembaga anggaran negara pendidikan tambahan di wilayah Kaluga“ Pusat Ekologi dan Biologi Regional ”Program pengembangan umum pendidikan umum tambahan“ Pembuka alam ”untuk siswa usia sekolah dasar (7-11 tahun) periode pelaksanaan - 2 tahun Compiler: guru pendidikan tambahan : Timoshina E.V. Glebova S.V. Kaluga Daftar Isi Catatan Penjelasan Aktualitas program: Tujuan dan sasaran program. "

““ THEORETICAL MECHANICS ”Pedoman untuk latihan praktis di tahun ke-2 Fakultas Kedokteran dan Biologi pada semester 1 tahun akademik 2012-2013 spesialisasi 201000 - Sistem dan teknologi bioteknik 1. Pelajaran pengantar. Persamaan gerak dan persamaan lintasan titik. Pecahkan tugas-tugas berikut: 1. Menurut persamaan gerak suatu titik, temukan persamaan lintasannya dalam bentuk koordinat dan tunjukkan arah gerakan pada gambar: 1) x = 3t –5, y = 4 - 2t; 2) x = 2t, y = 8t2; 3) x = 3t2, y = 4t2; "

“Http://www.bio.bsu.by/zoology/shalapyonok_en.phtml Page 1 Cetak Situs web versi cetak Fakultas Biologi atau kembalikan Shalapenok Elena Semenovna Personalia dari Departemen Zoologi Fakultas Biologi BSU. PERSONIL DARI DEPARTEMEN ZOOLOGI Staf Pengajar Staf pendukung pendidikan Asisten peneliti mahasiswa PhD dan mahasiswa Elena Shalapenok (1931-2010) Associate professor of zoology, Ph.D., profesor lulusan dari Belarus. "

“KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN ILMU DARI FEDERASI RUSIA FATERASI UNIVERSITAS NEGERI Saya menyetujui: Rektor _ A.D. Gulyakov " _ 201. Jumlah pendaftaran intrauniversitas PROGRAM PENDIDIKAN UTAMA PROFESIONAL PENDIDIKAN TINGGI Area pelatihan 020400 Biologi Pelatihan profil Bioekologi Kualifikasi (gelar) lulusan Sarjana Studi bentuk penuh waktu Penza, 2013 DAFTAR ISI 1 KETENTUAN UMUM. 1.1 Program pendidikan profesional dasar pendidikan tinggi. "

"Anotasi ke program kerja pada subjek" biologi "untuk 2014-2015 tahun akademik Kelas 9 Tujuan dari program kerja adalah untuk menciptakan kondisi untuk perencanaan, pengorganisasian dan mengelola proses pendidikan di subjek biologi ke bagian" Dasar-dasar Biologi Umum ".Program kerja mencakup bagian berikut: Bagian 1. Catatan penjelasan, yang menentukan tujuan umum pendidikan umum, dengan mempertimbangkan spesifik subjek akademik. Program kerja didasarkan pada program perkiraan yang utama. "

“KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN ILMU DARI FEDERASI RUSIA FIA Lembaga Federal Negara Pendidikan Tinggi Profesional“ UNIVERSITAS NEGARA TYUMEN ”Institut Biologi Departemen Ekologi dan Genetika O.N. Zhigileva DASAR EKOLOGI Kompleks pendidikan dan metodis. Program kerja untuk siswa ke arah pelatihan 42.03.02 Jurnalisme (tingkat sarjana), profil pelatihan "Print", "Jurnalisme televisi", "jurnalisme Konvergen". "

“FEDERASI RUSIA PENDIDIKAN DAN ILMU PENGETAHUAN Lembaga Anggaran Negara Federal Pendidikan Tinggi Lebih Tinggi UNIVERSITAS NEGARA TIPE Institut Biologi Departemen Botani, Bioteknologi dan Arsitektur Lanskap Marina Semenova Dasar biologis komposisi dengan tumbuhan Metodologi pendidikan yang kompleks Program kerja untuk siswa arah 35.03.10 Profil arsitektur lansekap Landscape berkebun dan lansekap. "

“KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN ILMU FEDERASI RUSIA FITUR FEDERASI Federal Lembaga Pendidikan Tinggi Pendidikan Tinggi UNIVERSITAS NEGARA Institute of Biology Departemen Botani, Bioteknologi dan Arsitektur Lansekap Belozerova A.A. Program kerja untuk siswa arah 35.03.10 Arsitektur lansekap profil pendidikan purna waktu Hiasan hias dan. "

“KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN ILMU FEDERASI RUSSIAN Lembaga Anggaran Negara Federal Pendidikan Tinggi Profesional“ UNIVERSITAS NEGARA TYUMEN ”Institut Jurusan Zoologi dan Ekologi Ekologi Hewan OA Aleshina BASIC EDUCATIONAL UMUM PRAKTEK BIOLOGIS: ZOOOLOGI INVERTILITY Kompleks pendidikan dan metodis. Program kerja untuk siswa ke arah pelatihan 06.03.01 - "Biologi" (sarjana akademik), profil pelatihan. "

“KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN ILMU FEDERASI RUSIA FIA Lembaga Federal Negara Pendidikan Tinggi Profesional“ UNIVERSITAS NEGARA TYUMEN ”Institut Biologi Departemen Anatomi dan Fisiologi Manusia dan Hewan Lepunova O.N. BIOLOGI MOLEKULER VIRUS DAN PARASIT INTRASELULER LAINNYA Kompleks pendidikan-metodis. Program kerja untuk siswa 06.03.01 arah "Biologi", profil: biokimia; bentuk studi - Tyumen full-time. "

"Badan Medis dan Biologi Federal" FEDERAL NEGARA INSTITUSI KESEHATAN NEGARA. "

“KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN ILMU FEDERASI RUSSIAN Pendirian Pendidikan Negara Federal Pendidikan Tinggi Lebih Tinggi UNIVERSITAS NEGARA TYUMEN Institut Biologi Departemen Botani, Bioteknologi dan Arsitektur Lansekap S.P. PAJAK RESMI Pendidikan dan metodis kompleks. Program kerja untuk siswa dari arah 35.03.10 Arsitektur lansekap pendidikan penuh waktu dari profil Tanaman hias tumbuh dan pembibitan Tyumen State University. "

“Universitas Negeri Timur Jauh V.V. Isaeva SYNERGETICS UNTUK BIOLOGIS Kursus Pengantar kursus Panduan Studi Vladivostok Panduan studi ini didasarkan pada program kuliah untuk mahasiswa Jurusan Biologi Sel dari Universitas Negeri Timur Jauh, dibaca oleh penulis selama beberapa tahun, dan merupakan deskripsi yang disederhanakan dan diilustrasikan dari ide dasar ilmu non-linear (sering disebut sinergi), termasuk teori bifurkasi dan. "

“INSTITUSI PENDIDIKAN ANGGARAN GUNUNG“ SEKOLAH SEKOLAH №18 ”Dianggap pada pertemuan“ Setuju ”“ Disetujui ”ShMO Ilmu Pengetahuan Alam Wakil Direktur Direktur MBOU“ Sekolah Menengah No. 18 ”Pemimpin T.I. Antonovich di UVR LA Ishutin V.N. Nikitina Protocol No. 1 tanggal 23 Mei 2014. PROGRAM PENDIDIKAN BIOLOGI 5 9 KELAS (GEF) Abakan Catatan Penjelasan Program biologi ini didasarkan pada Standar Pendidikan Negara Federal. "


Artikel Terkait Hepatitis