Analisis kualitatif dan kuantitatif PCR untuk hepatitis C: negatif, positif, transkrip

Share Tweet Pin it

Hepatitis C adalah penyakit hati virus yang disebabkan oleh flavivirus HCV (dari kata bahasa Inggris hepatitis C virus), struktur yang mengandung molekul asam ribonukleat (RNA). RNA membawa kode genetik dari virus. Kehadirannya memungkinkan untuk analisis PCR untuk hepatitis C.

Bahaya HCV bagi seseorang terletak pada fakta bahwa apa yang disebut jendela serologis (waktu antara infeksi dan munculnya reaksi dari sistem kekebalan) bisa sangat panjang - dari beberapa minggu hingga enam bulan.

Ia tidak mendeteksi infeksi dan memulai perawatan tepat waktu.

Tergantung pada karakteristik individu dari organisme, pembawa HCV dapat memanifestasikan dirinya dalam bentuk akut, serta terjadi sebagai penyakit kronis yang akan memerlukan perawatan yang panjang dan mahal. Ketika antibodi terhadap HCV terdeteksi, serangkaian tes laboratorium dilakukan, termasuk PCR untuk hepatitis C. Tes ini dilakukan untuk semua orang yang antibodi darahnya terhadap HCV telah ditemukan.

Apa itu analisis PCR?

Analisis laboratorium PCR untuk hepatitis C - studi bahan biologis untuk mendeteksi keberadaan flavavirus.

Polymerase chain reaction (sebagai singkatan singkatan) menunjukkan nilai kuantitatif dari lesi virus tubuh, karakteristik kualitatifnya, serta genotipe virus yang mengandung RNA.

Atas dasar mereka, serta atas dasar analisis tambahan, metode dan durasi terapi, serta faktor epidemiologi (tingkat risiko penularan ke operator lain) ditentukan.

Apa itu Analisis RNA C RNA?

Hepatitis C PCR juga disebut analisis RNA (HCV RNA), karena Flavavirus mengandung partikel RNA dengan ukuran virion 30-60 nm. Salah satu fitur dari mikroorganisme ini adalah kecenderungan tinggi untuk mutasi.

Masing-masing subspesies (genotipe) dari virus memiliki ketahanan yang berbeda, yang menyebabkan metode pengobatan yang berbeda dan sifat prognosis lebih lanjut untuk pasien.

Bahan biologi (darah vena) diberikan pada perut kosong dan, sebagai suatu peraturan, diuji dengan metode PCR Real-Time (diagnostik real-time yang sangat sensitif dengan batas deteksi yang lebih rendah 15 IU / ml menggunakan sistem otomatis tertutup).

Ada tes lain, misalnya COBAS AMPLICOR dengan sensitivitas 50-100 IU / ml. Untuk setiap uji laboratorium, ambang sensitivitas penting, yaitu kemampuan reagen untuk mendeteksi konsentrasi minimum virus dalam bahan biologis.

Jenis analisis untuk hepatitis C oleh PCR

Hepatitis C PCR mencakup tiga komponen penting:

  • analisis kualitatif;
  • analisis kuantitatif;
  • genotyping.

Tes-tes ini memungkinkan Anda untuk menentukan sifat viremia, serta ciri-ciri genetik dari patogen. Tergantung pada sensitivitas sistem diagnostik, penelitian dilakukan sekali, dan kadang-kadang tes kedua dilakukan dengan pereaksi yang lebih sensitif untuk mengkonfirmasi atau memperbaiki hasilnya.

PCR hepatitis C berkualitas tinggi

Analisis PCR hepatitis C kualitatif adalah nama umum lain untuk analisis reaksi berantai polimerase. Sensitivitas standar dari tes, yang memungkinkan untuk mendeteksi keberadaan lesi virus, adalah dalam kisaran 10-500 IU / ml.

Analisis PCR negatif untuk hepatitis C menunjukkan bahwa konsentrasi virus dalam darah pasien berada di bawah ambang kerentanan sistem diagnostik.

Jika PCR berkualitas tinggi memberikan jawaban "tidak terdeteksi", maka untuk pengobatan selanjutnya penting untuk mengetahui ambang sensitivitas reagen.

Fraksi protein terhadap flavavirus muncul jauh kemudian.

PCR Kuantitatif Hepatitis C

PCR hepatitis C kuantitatif adalah indikator viral load, yang mencerminkan tingkat konsentrasi RNA flavavirus dalam tubuh. Ini adalah indikator yang menunjukkan berapa banyak fragmen RNA virus yang terkandung per sentimeter kubik darah. Hasil PCR RNA hepatitis C dalam tes kuantitatif dalam sistem konvensional ditunjukkan dalam unit internasional per mililiter (IU / ml) dan dapat direkam dengan cara yang berbeda, misalnya, 1,7 juta atau 1.700.000 IU / ml.

Diagnostik PCR kuantitatif hepatitis C diresepkan untuk pasien sebelum memulai terapi antiviral, dan pada minggu ke 12 pengobatan, untuk mengevaluasi hasil dari metode yang dipilih untuk menangani HCV. Viral load memungkinkan untuk menentukan tiga indikator penting dari penyakit:

  • infektivitas, yaitu tingkat risiko penularan virus dari satu karier ke yang lain (semakin tinggi konsentrasi RNA virus flava, semakin tinggi kemungkinan menginfeksi orang lain, misalnya, melalui kontak seksual);
  • metode dan efektivitas pengobatan;
  • durasi dan prognosis dari terapi antiviral (semakin tinggi viral load, semakin lama perawatan berlangsung).

Diagnostik PCR kuantitatif hepatitis C tergantung pada jenis tes laboratorium dan ambang sensitivitasnya. Batas bawah norma dianggap indikator hingga 600.000 IU / ml, nilai rata-rata berada di kisaran 600.000-700.000 IU / ml. Hasil 800.000 IU / ml dan di atas dianggap tingkat tinggi virus yang mengandung RNA.

Genotyping

Karena aktivitas mutasi HCV yang tinggi di alam, ketika pengujian penting untuk mengidentifikasi genotipe virus mana dalam darah pasien. Secara total, 11 genotipe virus hepatitis C telah tercatat di planet ini, yang mencakup banyak subspesies (subtipe). Di wilayah Federasi Rusia didistribusikan 1,2 dan 3.

RNA PCR Hepatitis C bersama dengan genotyping adalah komponen yang sangat penting dari analisis, karena memungkinkan dokter menentukan resistensi (resistansi) virus, memilih obat yang tepat dan meresepkan pengobatan.

Genotyping juga memungkinkan Anda untuk secara tidak langsung menentukan keadaan hati. Sebagai contoh, 3 genotipe HCV sering disertai dengan steatosis, di mana lemak terakumulasi dalam sel-sel organ.

Tes darah untuk PCR untuk hepatitis C harus menghasilkan angka yang menentukan genotipe. Tanggapan laboratorium dapat mengatakan "tidak diketik" - dan ini berarti bahwa virus ada dalam darah manusia yang tidak terdeteksi oleh sistem uji. Ini mungkin menunjukkan bahwa genotipe tidak khas untuk suatu wilayah geografis tertentu. Dalam hal ini, Anda harus mengulang analisis dengan sensitivitas sistem diagnostik yang lebih tinggi.

Decoding analisis PCR untuk hepatitis C

Tes untuk dekripsi kuantitatif PCR hepatitis C dapat didasarkan pada data di atas. Ketika memperoleh hasil tes laboratorium, data berikut biasanya ditulis:

  • "Ditemukan" / "tidak ditemukan" (PCR berkualitas tinggi untuk hepatitis C);
  • jumlah fraksi yang mengandung RNA, misalnya 831.680 ME / ml (analisis PCR kuantitatif);
  • gambar yang menentukan genotipe HCV, misalnya - 1, 2, 3, 4;
  • Nama tes ini paling sering Real-time.

Yang paling penting dalam mengartikan analisis PCR untuk hepatitis C adalah paragraf kedua, yang menunjukkan viral load, yang menentukan prognosis, metode dan durasi pengobatan.

Jika tes PCR untuk hepatitis C negatif, dan ELISA positif - apa artinya ini?

Untuk menguraikan tes laboratorium, penting untuk menghubungi ahli hepatologi atau spesialis penyakit menular yang akan menjelaskan informasi yang diperoleh sesuai dengan jenis sistem diagnostik dan ambang batas sensitivitasnya. Dalam praktek medis, ada banyak data tes darah yang dapat menyesatkan seseorang tanpa pendidikan medis.

Sebagai contoh, jika tes untuk PCR hepatitis C negatif, dan ELISA positif, itu mungkin berarti bahwa tidak ada HCV dalam darah pasien saat ini, tetapi sebelumnya ia menderita bentuk akut hepatitis C. Hal ini diyakini bahwa enzim immunoassay positif (ELISA) menunjukkan bahwa ada antibodi dalam darah yang telah diproduksi setelah invasi virus di masa lalu. Tetapi dalam praktek medis modern, analisis ELISA dianggap tidak cukup andal dan sering memberikan hasil yang tidak biasa, sehingga dokter menggunakannya sebagai skrining primer. Ketika mendiagnosis suatu penyakit, spesialis dipandu secara tepat oleh tes PCR.

Video yang berguna

Video berikut memberikan deskripsi yang sangat rinci dan menarik tentang esensi metode PCR, bagaimana analisis dilakukan:

Kesimpulan

Untuk analisis PCR untuk hepatitis C, darah vena biasanya diambil. Paling sering ada asupan ganda bahan biologis - untuk ELISA, dan langsung untuk tes PCR. Untuk hasil tes yang benar, kepatuhan dengan aturan dasar untuk pengambilan sampel laboratorium dari bahan biologis diperlukan:

  • darah untuk analisis diberikan pada paruh pertama hari dengan perut kosong;
  • antara makan dan pengambilan sampel darah harus memakan waktu minimal 8 jam;
  • alkohol dan makanan yang digoreng juga harus dikeluarkan sebelum mengambil tes;
  • selama sehari sebelum menyumbangkan darah, perlu untuk menghindari aktivitas fisik yang tinggi.

Hasil tes darah biasanya siap pada hari berikutnya.

Diagnosis Virus Hepatitis C

Hepatitis C virus (HCV) adalah virus yang mengandung RNA dari keluarga Flaviviridae. Infeksi ini dapat berkembang biak dalam sel darah (monosit, neutrofil, limfosit B dan makrofag), dan juga mempengaruhi sel-sel hati itu sendiri - hepatosit. Karena tingginya tingkat aktivitas mutasi, jenis hepatitis ini mampu menghindari paparan sistem kekebalan tubuh manusia.

Ada 11 genotipe dan massa subtipe dari virus semacam itu, yang berbeda dalam tingkat kerusakan hati dan mempengaruhi durasi pengobatan hepatitis. Variasi hepatitis C semacam itu memerlukan metode terapi antiviral yang berbeda. Misalnya, hepatitis 1 dan 4 genotipe perlu dirawat selama 48 minggu, dan untuk terapi melawan virus dari jenis ke-2 dan ke-3, mungkin diperlukan waktu hanya 24 minggu.

Setelah tes cepat untuk hepatitis C memberi hasil positif, analisis PCR dilakukan untuk mendeteksi RNA virus dalam sampel darah.

Diagnostik PCR

Polymerase chain reaction (PCR) adalah teknik eksperimental untuk mendeteksi virus. Analisis hepatitis C semacam itu dapat secara signifikan meningkatkan konsentrasi beberapa fragmen DNA atau RNA virus dalam sampel yang ditransfer. Ini memungkinkan untuk mengenali mereka dan bahkan menghitung jumlahnya.

Tes hepatitis C ini dilakukan sesuai dengan prosedur berikut:

  1. Sampel darah (materi genetik) yang mungkin mengandung gen hepatitis yang diinginkan dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Substansi khusus, primer, ditempatkan di atasnya, mereka adalah segmen panjang pendek dari gen yang diinginkan, yang secara kimiawi disintesis. DNA atau RNA polimerase juga ditambahkan ke bejana ini, ia mampu membangun rantai asam nukleat yang benar-benar identik dengan aslinya. Pemilihan nukleotida bebas, yang merupakan bahan bangunan khusus untuk DNA dan RNA, ditambahkan ke komposisi yang diperoleh, dan salah satunya mengandung partikel kecil fosfor radioaktif.
  2. Campuran yang dihasilkan pada awalnya dipanaskan sampai 95 derajat, sebagai akibatnya kedua heliks DNA yang terjalin dalam keadaan normal dilepaskan.
  3. Untuk melanjutkan analisis, obat didinginkan, di mana titik primer melekat pada wilayah genom virus hepatitis yang diinginkan, mencegah DNA terbentuk menjadi heliks ganda. Ketika campuran mendingin, polimerase mencari rantai nukleotida tunggal. Selama pemasangan enzim ini, ia meluncur di sepanjang rantai DNA (sebagai balok di sepanjang tali), dan pada heliks ganda itu tidak mampu "bekerja", untuk tujuan ini campuran dipanaskan.
  4. Untuk memperpanjang analisis, panaskan kembali dilakukan, yang sekali lagi mengarah pada pemisahan rantai nukleotida. Ketika siklus PCR tersebut dilakukan dalam sampel, jumlah gen hepatitis yang diinginkan meningkat dalam proporsi geometrik, dan sisa bahan genetik diproduksi (dibentuk) hanya dalam pola linier.
  5. Untuk menyelesaikan penelitian, solusinya dibersihkan dari partikel nukleotida sisa. Mereka dipisahkan oleh elektroforesis, dengan pemisahan oleh parameter berat molekul rantai DNA. Tes semacam itu untuk hepatitis C menggunakan PCR memungkinkan Anda untuk menentukan apakah gen virus yang diinginkan ada dalam sampel atau tidak.

Keuntungan dari tes ini adalah ambang reaksi PCR yang sangat tinggi. Teknik seperti itu untuk diagnosis, idealnya, diperlukan hanya satu genom virus untuk seluruh sampel.

Selain itu, PCR ini benar-benar spesifik. Di masing-masing gen ada urutan nukleotida unik, yang, seperti sidik jari, tidak dapat diulang di mana saja. Untuk analisis ini pada hepatitis C, primernya disintesis sehingga mereka benar-benar sesuai dengan wilayah unik dari gen yang dicari, yang tidak ada urutan lain.

Teknik ini juga memungkinkan Anda menganalisis untuk hepatitis C dan menentukannya, membantu menegakkan diagnosis akhir.

Analisis laboratorium seperti itu memberikan informasi lebih dari sekadar ada atau tidak adanya RNA virus hepatitis C atau jenis lain dalam sampel darah. Menentukan parameter radiasi radioaktif, adalah mungkin untuk mengidentifikasi berapa banyak bahan genetik yang diinginkan pada awalnya dalam sampel yang diteliti. Ini memungkinkan Anda menentukan parameter dari apa yang disebut viral load - konsentrasi partikel RNA hepatitis dalam volume tertentu.

Analisis kualitatif PCR

Analisis ini memungkinkan untuk menentukan keberadaan virus hepatitis B dalam sampel darah. Ini harus dilakukan untuk semua orang yang telah ditemukan antibodi terhadap hepatitis.

Sebagai hasil dari penelitian tersebut, hanya ada dua nilai:

  • "Terdeteksi." Hasil tes yang positif tersebut ditafsirkan sebagai berikut: dalam sampel yang dianalisis dari fragmen material biologis RNA virus hepatitis ditemukan. Itu mengikuti dari ini bahwa ada fakta bahwa pasien terinfeksi dengan virus ini. Ini mungkin menunjukkan bahwa patogen hepatitis berkembang biak di dalam tubuh dan menginfeksi sel-sel baru, menghancurkan hati.
  • "Tidak terdeteksi." Hasil ini mengatakan bahwa dalam sampel yang dianalisis di laboratorium ini, tidak ada fragmen RNA yang spesifik untuk virus hepatitis C yang terdeteksi.. Dalam kasus-kasus seperti itu, dikatakan bahwa tingkat konsentrasi berada di bawah ambang batas sensitivitas pengujian.

Tes semacam itu mungkin juga positif-palsu atau salah-negatif, karena kontaminasi biomaterial atau kehadiran dalam sampel zat spesifik yang bereaksi dengan komponen kimia yang diperlukan untuk analisis.

Perlu ditekankan bahwa pada fase akut hepatitis C, penelitian kualitatif menggunakan metode PCR dapat mendeteksi RNA setelah 1-2 minggu dari saat infeksi organisme. Ini berarti bahwa penyakit ini dapat dideteksi jauh sebelum munculnya gejala eksternal atau munculnya antibodi terhadap hepatitis di dalam tubuh.

Pengambilan sampel darah (dari pembuluh darah) lebih disukai dilakukan saat perut kosong.

Analisis Kuantitatif PCR

Dengan menggunakan analisis ini, tentukan tingkat konsentrasi virus hepatitis pada pasien (viral load). Tes semacam itu harus dilalui untuk memperkirakan jumlah RNA virus per unit volume tertentu.

Menguraikan tes untuk hepatitis C, dilakukan sesuai dengan metode ini, dapat memiliki hasil sebagai berikut:

  • Indikator kuantitatif (dalam angka)

Konsentrasi virus (jumlah) diberikan dalam istilah numerik. Untuk ini, unit pengukuran yang berbeda digunakan: baik IU / ml (unit internasional per mililiter) atau salinan / ml (jumlah salinan RNA virus per mililiter). Rata-rata, 1 IU / ml sesuai dengan 4 salinan / ml, karena sistem pengujian yang berbeda memiliki faktor konversi yang berbeda untuk unit tersebut.

Nilai viral load yang rendah dianggap kurang dari 400.000 IU / ml, dan 8.000.000 IU / ml tinggi.

Penilaian kuantitatif semacam itu memungkinkan untuk menentukan tingkat penyakit menular ("infeksi") pasien. Semakin banyak indikator analisis ini, semakin tinggi probabilitas risiko penularan patogen ke orang lain (melalui kontak seksual atau secara vertikal).

Vonis ini berarti bahwa metode kuantitatif tidak dapat mendeteksi RNA Hepatitis, tetapi virus itu sendiri ada di dalam tubuh, hanya dalam konsentrasi yang sangat rendah. Hal ini dikonfirmasi oleh analisis kualitatif tambahan PCR, dan dengan hasil positifnya, ini membuktikan fakta adanya hepatitis.

  • Hasil Tidak Terdeteksi

    Interpretasi positif dari analisis ini menunjukkan bahwa tes kuantitatif itu sendiri dalam sampel darah tidak dapat mendeteksi partikel RNA spesifik dari virus hepatitis C.

  • Analisis kuantitatif PCR yang dilakukan pada periode terapi antiviral yang berbeda (minggu 1, 4, 12 dan 24) memungkinkan kita untuk menilai efektivitas pengobatan dan melakukan amandemen yang diperlukan.

    Analisis spesifisitas

    Tes ini harus dilalui untuk menentukan genotipe hepatitis C yang berbeda. Saat ini, ada 11 genotipe patogen ini dan banyak subtipe. Di negara kita, genotipe hepatitis C dari spesies 1, 2 dan 3 adalah umum. Di laboratorium mereka dapat mengidentifikasi berbagai subtipe dari spesies ini: 1a, 1b, 2a, 2b, atau 3, 4, 5, 6 genotipe dengan berbagai modifikasi subtipe. Untuk semua hepatitis ini, spesifisitas tekadnya adalah 100%.

    Menentukan modifikasi genotip memungkinkan untuk memilih perawatan yang tepat. Kehadiran jenis genotipe tertentu pada pasien tidak menunjukkan bahwa penyakit lebih mudah atau lebih rumit, mereka hanya varietas virus hepatitis, dan tidak lebih.

    Dalam kasus-kasus ketika genotipe virus tidak dapat diisolasi di laboratorium, hasilnya dapat diberikan: “Tidak diketik. Apakah genotipe yang diselidiki: seperti ini dan itu ”(misalnya, 1a, 2c, 3av). Penguraian ini menunjukkan bahwa di laboratorium ini tidak ada reagen yang tepat yang dapat menentukan genotipe virus hepatitis. Penelitian ini diuji untuk virus, data dalam daftar, tetapi kesesuaiannya dengan sampel RNA tidak diidentifikasi.

    Untuk membuat diagnosis akhir, hanya satu jenis analisis yang tidak memadai. Setiap tes dapat memberikan hasil positif yang salah. Untuk secara akurat menentukan jenis hepatitis dan tingkat kerusakan pada infeksi tubuh ini, melakukan studi yang komprehensif. Ini dilakukan biopsi hati dan menguji enzim-enzimnya: ALT, ASAT, serta alkalin fosfatase dan LDH. Tes bilirubin dan analisis indeks prothrombin juga dapat dilakukan.

    Hanya satu set tes dan tes laboratorium, dengan analisis umum kondisi pasien, yang akan membantu menentukan keberadaan hepatitis di tubuh, bentuknya, serta tingkat keparahannya. Atas dasar mereka, dokter dapat menentukan perawatan lebih lanjut dan membuat kemungkinan prognosis untuk pasien.

    HCV, RNA dikuantifikasi [PCR real-time]

    Sebuah penelitian untuk mengidentifikasi agen penyebab hepatitis C (HCV), di mana keberadaan bahan genetik (RNA) dari virus dan kuantitasnya (viral load) dalam sampel darah ditentukan dengan menggunakan metode reaksi rantai polimerase real-time (RT-PCR).

    RNA HCV dapat dideteksi pada konsentrasi yang berada di luar batas bawah rentang konsentrasi linier. Rentang konsentrasi linear adalah rentang di mana Anda dapat secara akurat menghitung jumlah salinan patogen. Untuk analisis ini, rentang linier konsentrasi DNA HCV yang ditentukan oleh penguat yang mendeteksi adalah 7,5 × 10 2 - 1,0 × 10 8 salinan / ml sampel.

    Sinonim Rusia

    Hepatitis C virus (HCV), penentuan kuantitatif RNA.

    Sinonim bahasa Inggris

    Hepatitis C Virus RNA, Kuantitatif, PCR Real-Time, Darah, Viral load HCV, RNA Virus Hepatitis C, Jumlah.

    Metode penelitian

    Reaksi polymerase chain reverse transcriptase real-time.

    Biomaterial apa yang dapat digunakan untuk penelitian?

    Bagaimana cara mempersiapkan diri untuk belajar?

    Jangan merokok selama 30 menit sebelum menyumbangkan darah.

    Informasi umum tentang penelitian

    Hepatitis C virus (HCV) adalah virus RNA dari keluarga Flaviviridae yang menginfeksi hati. Ia mampu berkembang biak dalam sel darah (neutrofil, monosit dan makrofag, limfosit B) dan menyebabkan cryoglobulinemia, penyakit Sjogren dan penyakit limfoproliferatif sel B. HCV, karena aktivitas mutasinya yang tinggi, mampu menghindari paparan terhadap mekanisme perlindungan sistem kekebalan tubuh. Ada 6 genotipe dan banyak subtipe dari virus, yang memiliki arti yang berbeda untuk memprediksi perkembangan penyakit dan efektivitas terapi antiviral.

    Cara penularan utama adalah melalui darah (obat untuk transfusi darah dan plasma, organ donor, jarum suntik yang tidak steril, jarum, alat untuk menato, menusuk). Infeksi melalui kontak seksual dan bayi dari ibu selama persalinan mungkin, tetapi ini jarang terjadi.

    Hepatitis virus akut biasanya ditandai dengan asimtomatik saja dan tetap tidak terdeteksi dalam banyak kasus. Hanya 15% dari orang yang terinfeksi penyakit ini akut, dengan mual, nyeri tubuh, kurang nafsu makan dan penurunan berat badan (jarang disertai penyakit kuning). 60-85% dari orang yang terinfeksi mengembangkan infeksi kronis, yang 15 kali lebih tinggi daripada frekuensi infeksi kronis pada hepatitis B. Hepatitis virus kronis C terjadi dengan peningkatan enzim hati dan manifestasi gejala yang buruk. Pada 20-30% pasien, penyakit ini mengarah ke sirosis hati, meningkatkan risiko gagal hati dan karsinoma hepatoseluler.

    Deteksi HCV RNA menunjukkan perbanyakan virus di dalam tubuh dan merupakan metode untuk mendiagnosis penyakit. Materi genetik virus dapat dideteksi oleh PCR 10–12 hari setelah infeksi - selama periode ini, antibodi spesifik, yang terbentuk beberapa bulan setelah infeksi, tidak ada dan indikator biokimia dari fungsi hati berada dalam nilai referensi.

    Melalui PCR, virus RNA terdeteksi secara kualitatif atau kuantitatif. Karena metode kualitatif, keberadaan virus hepatitis C dan reproduksi aktifnya dikonfirmasi. Penentuan kuantitatif dari viral load sehubungan dengan genotipe HCV memungkinkan Anda untuk memantau terapi yang sedang berlangsung dan memprediksi perjalanan penyakit.

    Efektivitas pengobatan dinilai dengan jumlah RNA sebelum dan selama terapi. Biasanya, viral load darah menurun beberapa kali dalam tiga bulan pertama pengobatan yang berhasil. Dengan terapi yang efektif, viremia berkurang dua kali lipat dalam 4-12 minggu pertama pengobatan dan setelah akhir terapi, materi genetik virus tidak terdeteksi dalam darah. Tidak adanya penurunan viremia setelah 12 minggu dari awal pengobatan menunjukkan ketidakefektifannya. Dianjurkan untuk melakukan analisis sebelum memulai terapi, pada minggu ke-4, 12 dan 24 pengobatan dan 24 minggu setelah akhir pelatihan. Durasi terapi dan frekuensi kuantifikasi RNA virus hepatitis C tergantung pada genotipe virus dan tingkat kerusakan hati.

    Untuk apa penelitian itu digunakan?

    • Untuk mengkonfirmasi diagnosis "virus hepatitis C".
    • Untuk memprediksi perjalanan virus hepatitis C.
    • Untuk memantau terapi antiviral dan memutuskan taktik pengobatan lebih lanjut.

    Kapan sebuah studi dijadwalkan?

    • Dengan deteksi kualitatif RNA hepatitis C.
    • Pada hepatitis C akut dan kronis virus.
    • Ketika dicampur hepatitis.
    • Ketika merencanakan, selama dan setelah terapi antiviral berakhir.

    Apa hasil yang dimaksud?

    • Tidak terdeteksi - tidak ada virus hepatitis C RNA yang terdeteksi atau nilai di bawah batas sensitivitas metode (200 kopi / ml = 400 IU / ml).
    • salinan / ml (IU / ml) - RNA virus hepatitis C terdeteksi. Viremia rendah (prognosis yang paling menguntungkan dari penyakit dan efektivitas terapi).
    • > 2 * 10 ^ 6 salinan / ml (> 4 * 10 ^ 6 IU / ml) - RNA virus hepatitis C terdeteksi. Viremia tinggi.
    • > 1,0 * 10 ^ 8 salinan / ml (> 2 * 10 ^ 8 IU / ml) - RNA virus Hepatitis C terdeteksi pada konsentrasi di atas rentang konsentrasi linier.

    Rentang linier konsentrasi RNA dari virus hepatitis C, ditentukan oleh penguat yang mendeteksi, adalah 7,5 * 10 ^ 2 - 1,0 * 10 ^ 8 salinan / ml (1,5 * 10 ^ 3 - 2 * 10 ^ 8 IU / ml).

    Apa yang bisa mempengaruhi hasilnya?

    Hasil yang tidak dapat diandalkan dapat diperoleh dengan:

    • kontaminasi biomaterial;
    • kehadiran dalam sampel inhibitor - zat kimia dan protein yang mempengaruhi berbagai komponen PCR;
    • kehadiran heparin dalam darah.

    Catatan penting

    • Tingkat viral load darah tidak menunjukkan tingkat kerusakan pada hati dan tingkat keparahan penyakit. Untuk evaluasi mereka, perlu untuk menyelidiki parameter biokimia dan bahan biopsi.
    • Ketika merencanakan perawatan, sangat penting untuk menentukan genotipe virus hepatitis C.

    Juga disarankan

    Siapa yang membuat penelitian?

    Sastra

    • Zh.I. Vozianova Penyakit infeksi dan parasit: Dalam 3 ton - K: Kesehatan, 2000. - Vol. 1.: 600-690.
    • Kiskun A.A. Studi imunologi dan serologis dalam praktek klinis. - M: OOO MIA, 2006. - 471-476 hal.
    • Prinsip Kesehatan Internal Harrison. 16 th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
    • Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, dan lainnya. Dalam sel vivo dari virus hepatitis C, ada pengaruh dari viral load, genotipe virus, dan fenotip sel. Darah. 1998 15 Mei; 91 (10): 3841-9.PMID: 9573022.
    • Revie D, Salahuddin SZ. Jenis sel manusia untuk replikasi virus hepatitis C in vivo dan in vivo: asersi lama dan bukti terkini. Virol J. 2011 11 Juli; 8: 346. doi: 10.1186 / 1743-422X-8-346. PMID: 21745397.

    Penelitian PCR untuk hepatitis C: jenis, indikasi, transkrip

    Viral hepatitis C adalah penyakit serius yang terjadi dengan kerusakan pada hati. Dalam delapan puluh persen pasien, itu menjadi kronis. Virus berkembang biak di sel-sel hati - hepatosit - dan menyebabkan kematian mereka. Jaringan mati digantikan oleh fokus jaringan ikat, fibrosis berkembang.

    Ketika fibrosis berkembang, hati tidak dapat melakukan fungsinya, sirosis hati dimulai, yang berbahaya karena komplikasinya: peningkatan tekanan dalam sistem vena portal, perdarahan gastrointestinal, gangguan pembekuan darah, perubahan mental karena kerusakan pada nuklei otak.

    Penyebab penyakit ini adalah infeksi oleh virus dari keluarga Flaviviridae, yang termasuk jenis virus RNA. Ini berarti bahwa bahan genetik dimana protein dari patogen disintesis dikodekan dalam molekul asam ribonukleat. Infeksi terjadi melalui darah, seksual, dan dari wanita hamil ke janin. Sayangnya, waktu yang cukup lama dapat terjadi antara infeksi dan dimulainya produksi antibodi - dari dua minggu hingga enam bulan. Ini tidak memungkinkan untuk menentukan infeksi dengan metode immunoassay dan memulai perawatan pada tahap awal.

    Apa itu analisis PCR?

    PCR adalah metode analisis molekuler, yang memungkinkan untuk mendeteksi bahan genetik dari patogen yang sudah ada dalam minggu pertama setelah infeksi menggunakan reaksi berantai polymerase. Studi ini memiliki spesifisitas yang tinggi, akurasi, dan memungkinkan tidak hanya untuk menentukan ada tidaknya virus, tetapi juga konsentrasi dan genotipe.

    Untuk penelitian, darah pasien diambil di mana RNA virus berpotensi berada. Primer ditambahkan ke darah - daerah buatan yang disintesis dari gen yang diinginkan dengan panjang kecil, dan RNA polimerase adalah enzim khusus yang berulang kali meningkatkan jumlah materi genetik patogen. Dengan menggunakan peralatan khusus, beberapa siklus pemanasan dan pendinginan dilakukan. Kemudian bahan dianalisis dan dibandingkan dengan gen virus yang diketahui, atas dasar kesimpulan yang dibuat tentang ada atau tidak adanya infeksi.

    Jenis analisis PCR untuk hepatitis C

    Ada tiga jenis analisis PCR:

    1. Analisis kualitatif PCR. Tahap pertama penelitian. Ini memungkinkan Anda mengidentifikasi bahan genetik virus di dalam darah.

  • Analisis kuantitatif PCR. Memungkinkan Anda untuk menentukan viral load - konsentrasi bahan genetik patogen dalam satu mililiter darah. Penelitian ini dilakukan sebelum dimulainya terapi, dan kemudian pada sesi pertama, keempat, kedua belas, dan (jika perawatannya panjang) dua puluh empat minggu untuk mengevaluasi keefektifannya.

  • Genotyping Agen penyebab hepatitis C sering dan cepat bermutasi. Ada tujuh varian genotipe virus yang ditemukan di planet ini. Di Rusia, jenis pertama, kedua dan ketiga adalah umum. Masing-masing genotipe memiliki ketahanan yang berbeda terhadap terapi, misalnya, efektivitas pengobatan jenis pertama adalah enam puluh persen, dan untuk yang kedua dan ketiga angka ini mencapai delapan puluh lima. Oleh karena itu, untuk memilih obat yang tepat dan meresepkan pengobatan jangka waktu yang cukup, perlu ditentukan dengan tepat jenis virus apa yang terinfeksi oleh pasien.
  • Indikasi untuk analisis PCR untuk hepatitis C

    Studi PCR diresepkan dalam kasus-kasus berikut:

    • kontak dengan orang yang sakit di mana infeksi bisa terjadi;
    • immunoassay enzim positif;
    • tanda-tanda sirosis: perubahan ukuran hati, pembesaran limpa, penampilan di perut pleksus vena subkutan;
    • munculnya gejala kerusakan hati: nyeri di perut kanan, menguningnya kulit;
    • peningkatan aktivitas ALT dan AST dalam analisis biokimia darah;
    • sebelum memulai pengobatan untuk menentukan viral load;
    • untuk memantau efektivitas terapi antiviral;
    • setelah perawatan untuk mengendalikan kekambuhan;
    • di hadapan didiagnosis hepatitis B, untuk mengecualikan kerusakan hati campuran.

    Penjelasan studi PCR tentang hepatitis C

    Decoding analisis PCR dan immunoassay enzim untuk hepatitis C harus dilakukan oleh spesialis penyakit hepatologi atau infeksi. Menganalisis hasil PCR diperlukan dalam kombinasi dengan data analisis biokimia darah, biopsi dan ultrasound. Hanya dokter yang memenuhi syarat yang akan dapat menganalisis hasil penelitian dan, berdasarkan mereka, meresepkan perawatan yang benar.

    Decoding analisis kualitatif.

    Dalam bahan biologis yang dianalisis ditemukan bahan genetik dari patogen. Infeksi dikonfirmasi.

    Infeksi tidak ada, atau jumlah RNA patogen di bawah batas sensitivitas.

    Decoding analisis kuantitatif.

    Tingkat normal untuk orang sehat. Ini berarti bahwa tidak ada RNA hepatitis C dalam materi yang diteliti, atau konsentrasinya di bawah ambang sensitivitas penelitian.

    Konsentrasi RNA berada di bawah kisaran kuantifikasi. Hasil ini diinterpretasikan dengan sangat hati-hati, menghubungkan mereka dengan data dari penelitian lain, sering kali dipelajari kembali.

    Tingkat viral load pada konsentrasi yang diberikan dianggap rendah. Biasanya, penurunan jumlah virus berarti bahwa terapi tersebut berhasil.

    Lebih dari 8 * 10 ^ 5 IU / ml

    Tingkat viral load pada konsentrasi yang diberikan dianggap tinggi.

    Lebih dari 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

    Jumlah RNA di atas batas atas rentang kuantifikasi. Tidak mungkin untuk menarik kesimpulan tentang tingkat viral load dengan hasil ini. Biasanya dalam kasus seperti itu, tes diulang dengan pengenceran sampel darah.

    Decoding genotyping.

    Terdeteksi RNA dari genotipe tertentu

    Virus Hepatitis C dari genotipe dan subtipe tertentu terdeteksi dalam biomaterial. Hasilnya dikodekan dalam angka Romawi dan huruf Latin, misalnya - 1a, 2b. Secara total ada tujuh genotipe dan enam puluh tujuh subtipe, namun, di Rusia hanya ada tiga jenis pertama.

    Hepatitis C virus RNA terdeteksi

    RNA ditemukan dalam darah genotipe langka untuk Rusia, yang tidak dapat dikaitkan dengan tipe pertama, kedua, atau ketiga. Lebih banyak penelitian diperlukan.

    Hasil ini menunjukkan bahwa pasien sehat, atau bahwa jumlah RNA patogen terlalu kecil.

    Ada kemungkinan bahwa analisis PCR untuk hepatitis C negatif, dan assay immunosorbent terkait enzim mengenali antibodi terhadap virus. Ini berarti bahwa pasien menderita hepatitis C akut dan sembuh sendiri. Sekitar dua puluh kasus infeksi menghasilkan pemulihan spontan jika tubuh pasien memiliki ketahanan yang cukup terhadap infeksi.

    Meskipun PCR adalah tes yang sangat akurat, hasilnya mungkin terdistorsi dalam situasi berikut:

    • darah diangkut ke laboratorium dalam kondisi yang tidak sesuai, suhu dilanggar;
    • sampel biomaterial terkontaminasi;
    • ada jejak sisa heparin dan antikoagulan lainnya di dalam darah;
    • Peneliti ditemukan sebagai inhibitor - zat yang memperlambat atau menghentikan reaksi berantai polymerase.

    Keunggulan PCR dibanding metode lainnya

    1. Diagnosa pada tahap awal. PCR mendeteksi materi genetik dari agen penyebab. Dengan menggunakan analisis imunofluoresensi, hanya imunoglobulin yang dapat ditentukan - zat yang diproduksi tubuh sebagai respons terhadap infeksi. Dalam kasus infeksi hepatitis C, interval antara infeksi dan permulaan respon imun mungkin beberapa minggu dan bulan, saat ini ELISA tidak akan efektif. PCR akan memberikan jawaban pada minggu pertama setelah infeksi.

  • Probabilitas kesalahan rendah. Dalam materi yang diteliti menentukan luas materi genetik, yang merupakan karakteristik dari hanya satu jenis patogen. Ini menghilangkan hasil yang salah. Ketika kesalahan ELISA dimungkinkan, karena jenis antibodi yang sama dapat dilepaskan terhadap virus yang berbeda - antibodi tersebut disebut antibodi silang.

  • Sensitivitas tinggi. PCR memungkinkan untuk mendeteksi RNA agen penyebab bahkan dalam jumlah minimal. Ini memungkinkan untuk mengidentifikasi infeksi yang tersembunyi.
  • Cara mempersiapkan donor darah untuk studi PCR

    Untuk analisis PCR hepatitis C, darah vena dikumpulkan. Biasanya, dua bagian darah diambil dari pembuluh darah pasien pada saat yang sama: yang pertama dikirim untuk PCR dan yang kedua oleh ELISA. Hal ini dilakukan untuk lebih akurat menilai berapa banyak pasien terinfeksi virus, dan bagaimana kekebalan melawannya.

    Biasanya pasien harus mematuhi aturan berikut:

    • tes darah diambil di pagi hari;
    • Interval antara makanan terakhir dan donor darah harus delapan hingga sepuluh jam;
    • dua atau tiga hari sebelum analisis, perlu untuk meninggalkan makanan yang digoreng dan berlemak, dan alkohol;
    • selama dua puluh empat jam sebelum analisis, pasien harus menghindari aktivitas fisik: jangan membawa beban, jangan pergi ke gym atau kolam renang.

    Apa itu RNA Hepatitis C?

    Studi tentang RNA virus hepatitis C adalah prosedur yang paling penting, yang memungkinkan Anda untuk mengatur durasi dan metode pengobatan pasien dengan akurasi yang tinggi. Diagnosis penyakit terdiri dari beberapa tes darah yang berbeda, seperti:

    • penanda hepatitis C (anti-HCV);
    • penentuan RNA virus hepatitis C (HCV RNA).

    Studi pertama dilakukan pada kecurigaan pertama hepatitis. Pilihan kedua adalah yang paling signifikan dalam pengobatan RNA HCV, jadi pertimbangkan dengan lebih detail.

    Apa itu virus hepatitis C?

    Viral hepatitis C, atau HCV, adalah penyakit infeksi yang menyerang hati. Infeksi dengan virus terjadi melalui darah. Anda dapat terinfeksi dengan melakukan transfusi darah, ketika aturan untuk mensterilkan alat medis tidak diikuti. Kurang sering ada kasus ketika penyakit ini diperoleh secara seksual atau dari ibu hamil ke janin. Hepatitis C dapat terdiri dari 2 jenis.

    Hepatitis C kronis adalah yang paling berbahaya. Ini adalah bentuk penyakit yang bisa berlangsung seumur hidup. Ini menyebabkan masalah serius dalam fungsi hati, seperti sirosis atau kanker. Pada 70-90% orang yang terinfeksi, penyakit ini menjadi kronis.

    Bahaya paling penting dari hepatitis C adalah bahwa ia terjadi secara terselubung, tanpa tanda-tanda ikterik. Pada saat yang sama, mereka paling sering mengeluh demam, mual dan muntah, kelemahan fisik, peningkatan kelelahan, kehilangan nafsu makan dan berat badan. Pada saat yang sama, pada latar belakang pengerasan kecil jaringan hati, degenerasi ganas cukup sering terjadi. Untuk alasan ini, hepatitis C sering disebut sebagai "bom waktu" atau "pembunuh penuh kasih sayang".

    Ciri lain dari penyakit ini adalah perkembangannya yang sangat lambat, diperkirakan dalam lusinan tahun.

    Sebagai aturan, mereka yang terinfeksi tidak merasakan gejala apa pun dan tidak menyadari kondisi mereka yang sebenarnya. Seringkali, penyakit hanya dapat dideteksi dengan menghubungi dokter pada subjek lain.

    Berisiko meliputi:

    • anak-anak yang menerima virus hepatitis C dari ibu mereka;
    • pecandu;
    • orang yang menusuk bagian tubuh atau ditato dengan instrumen yang tidak steril;
    • menerima donor darah atau organ (sampai 1992, ketika hemodialisis tidak dilakukan);
    • orang yang terinfeksi HIV;
    • staf medis yang kontak dengan pasien yang terinfeksi.

    Penentuan RNA Hepatitis C

    Definisi virus hepatitis C RNA, juga disebut Hepatitis C PCR, adalah studi tentang bahan biologis (darah), yang dapat digunakan untuk menentukan keberadaan langsung dari genomaterial virus hepatitis itu sendiri dalam tubuh (virus tunggal adalah sepotong RNA tunggal).

    Metode uji utama adalah PCR, atau metode reaksi berantai polymerase.

    Ada dua jenis tes darah untuk RNA HCV:

    Uji mutu

    Melakukan analisis kualitatif memungkinkan untuk menentukan apakah virus ada di dalam darah. Semua pasien yang antibodi C-hepatitisnya ditemukan harus lulus tes ini. Menurut hasilnya, Anda bisa mendapatkan 2 jawaban: virus "ada" atau "tidak ada". Dengan hasil tes positif (terdeteksi), seseorang dapat menilai reproduksi aktif virus yang menginfeksi sel-sel sehat di hati.

    Tes yang dilakukan pada PCR berkualitas tinggi disetel untuk sensitivitas tertentu, dari 10 hingga 500 IU / ml. Jika virus hepatitis terdeteksi dalam darah dengan kandungan spesifik kurang dari 10 IU / ml, deteksi virus mungkin menjadi tidak mungkin. Konten virus spesifik yang sangat rendah diamati di antara pasien yang telah diresepkan terapi antiviral. Oleh karena itu, penting bahwa sensitivitas sistem medis tinggi untuk mendiagnosis dan menetapkan hasil kualitatif dalam reaksi berantai polimerase.

    Seringkali, reaksi berantai polimerase C-hepatitis dilakukan segera setelah menemukan antibodi yang sesuai. Tes selanjutnya, selama berjalannya terapi antiviral, dilakukan pada minggu ke-4, 12 dan 24. Dan analisis lain setelah penghentian HTP dilakukan setelah 24 minggu. Kemudian - setahun sekali.

    Tes kuantitatif

    Analisis kuantitatif RNA PCR, kadang-kadang disebut viral load, menentukan konsentrasi (kandungan spesifik) dari virus dalam darah. Dengan kata lain, viral load didefinisikan sebagai viral load dalam jumlah tertentu, yang bisa dalam jumlah tertentu dari darah (biasanya digunakan 1 ml, sama dengan 1 cm dalam kubus). Unit untuk hasil tes adalah unit internasional (standar) dibagi dengan satu mililiter (IU / ml). Konten virus terkadang muncul berbeda, itu tergantung pada laboratorium tempat penelitian sedang dilakukan. Untuk hepatitis C, penentuan kuantitatif terkadang menggunakan nilai-nilai seperti salinan / ml.

    Anda harus memahami bahwa tidak ada ketergantungan khusus pada tingkat keparahan C-hepatitis pada konsentrasi strain ini dalam darah.

    Periksa "viral load" memungkinkan Anda untuk menentukan tingkat penyakit menular. Dengan demikian, risiko menginfeksi orang lain dengan virus meningkat dengan peningkatan konsentrasi hepatitis dalam darah. Selain itu, kandungan virus yang tinggi mengurangi efek pengobatan. Oleh karena itu, viral load yang rendah merupakan faktor yang sangat menguntungkan untuk pengobatan yang berhasil.

    Selain itu, tes hepatitis C dan penentuannya oleh PCR memainkan peran besar dalam penerapan terapi untuk penyakit dan menentukan keberhasilan pengobatan. Berdasarkan hasil tes, kursus rehabilitasi direncanakan. Misalnya, jika konsentrasi spesifik dari virus hepatitis terlalu lambat, terapi antiviral berlangsung lama, dan sebaliknya.

    Dalam pengobatan modern diyakini bahwa beban lebih dari 800.000 ME / ml tinggi. Beban lebih dari 10.000.000 ME / ml dianggap penting. Tetapi para ahli dari berbagai negara masih tidak memiliki pendapat yang sama tentang batas viral load.

    Frekuensi tes kuantitatif

    Dalam kasus umum, analisis kuantitatif hepatitis dilakukan sebelum terapi antiviral dan 3 bulan setelah akhir prosedur medis untuk menentukan kualitas terapi yang dilakukan.

    Akibatnya, tes kuantitatif akan dianggap sebagai penilaian kuantitatif dari hasil untuk sampel yang ditentukan di atas. Akibatnya, putusan "di bawah rentang terukur" atau "tidak terdeteksi dalam darah" akan dikeluarkan.

    Parameter sensitivitas tes kualitatif biasanya lebih rendah daripada sensitivitas analisis kuantitatif. Transkrip "Hilang" menunjukkan bahwa kedua jenis tes tidak menemukan RNA virus. Ketika indeks tes berada “di bawah rentang yang diukur,” analisis jenis kuantitatif kemungkinan besar tidak menemukan RNA hepatitis, meskipun ini menegaskan adanya virus dengan konten spesifik yang sangat kecil.

    Hepatitis C dan genotipnya

    Genotyping RNA virus hepatitis C mendiagnosis adanya tipe genetik hepatitis C yang berbeda. Lebih dari 10 jenis genom virus diketahui oleh sains, tetapi untuk praktik medis cukup untuk memisahkan beberapa genotipe yang memiliki bagian terbesar di wilayah tersebut. Menentukan jenis genetik memainkan peran kunci dalam memilih waktu pengobatan, yang sangat diperlukan jika Anda memperhitungkan berbagai macam efek samping obat untuk hepatitis.

    Metode mengobati virus hepatitis C

    Satu-satunya cara efektif untuk menyembuhkan virus hepatitis, sebagai aturan, adalah kombinasi dari 2 obat: interferon-alpha bersama dengan ribavirin. Secara individual, obat ini tidak efektif. Dosis obat yang dianjurkan dan waktu penggunaan harus diresepkan hanya oleh dokter dan secara individu untuk setiap pasien. Perawatan dengan obat-obatan ini bisa memakan waktu 6 hingga 12 bulan.

    Saat ini tidak ditemukan obat yang menjamin pemulihan seratus persen dari virus. Namun, dengan perawatan yang tepat, penyembuhan pasien bisa mencapai hingga 90% dari jumlah kasus.

    Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C

    Hepatitis adalah penyakit serius yang memiliki banyak penyebab. Dasar perkembangannya adalah kerusakan langsung atau tidak langsung ke hati. Mempertimbangkan pentingnya untuk seluruh organisme, kita hanya bisa menebak betapa sulitnya patologi. Dalam artikel ini kami akan memeriksa lebih detail tentang fitur kursus dan diagnosis laboratorium hepatitis C.

    Penyebab penyakit ini adalah agen virus yang mengacu pada patogen yang mengandung RNA. Ini memiliki ciri khas - kemampuan untuk bermutasi, yaitu, untuk mengubah strukturnya. Karena ini, infeksi lolos dari serangan sistem kekebalan tubuh dan dalam banyak kasus menyebabkan peradangan kronis di hati.

    Mengingat adanya subtipe yang berbeda dari virus, pemilihan obat harus didasarkan pada hasil genotipe. Meskipun sudah lama mempelajari penyakit dan struktur HCV, belum mungkin mengembangkan vaksin spesifik untuk penyakit ini.

    Kesulitan diagnosis dini terletak pada perjalanan hepatitis asimptomatik, sebagai akibat dari seseorang mengunjungi dokter pada tahap sirosis. Untuk mendeteksi penyakit tepat waktu, pemeriksaan medis yang teratur diperlukan. Hanya dengan uji laboratorium darah apakah mungkin untuk mendeteksi HCV dan mencegah kontaminasi orang lain. Faktanya adalah bahwa pembawa infeksi dapat untuk waktu yang lama tidak menebak tentang patologi dan terus menularkan virus ke orang yang sehat.

    Cara penularan

    Dalam banyak kasus, virus menyebar melalui darah, karena mengandung konsentrasi agen patogen yang paling tinggi. Dengan demikian, infeksi ditularkan:

    • dengan hemodialisis;
    • dengan jarum yang terinfeksi;
    • dalam proses pertempuran, ketika kulit terluka, dan kontak darah terjadi;
    • dengan transfusi darah (transfusi darah).

    Probabilitas infeksi selama keintiman tidak signifikan, karena air mani dan cairan vagina mengandung sedikit patogen. Risiko infeksi meningkat secara signifikan melanggar integritas membran mukosa dari alat kelamin. Ini diamati dengan seks agresif dan anal.

    Adapun mode transmisi vertikal, itu dilakukan dalam proses persalinan. Pada masa gestasi janin, patogen tidak dapat menembus plasenta ke embrio. Pada persalinan alami, agen patogen ditransmisikan ke anak ketika kulit terluka, ketika kontak dengan darah ibu diamati.

    Setelah penetrasi patogen menjadi organisme yang sehat, sintesis antibodi dimulai, yang merupakan perlindungan dari infeksi dan termasuk struktur kekebalan tubuh. Mereka ditemukan dalam studi awal seseorang yang menggunakan ELISA.

    Reaksi berantai polimerase dilakukan untuk mengkonfirmasi diagnosis pasien. Ini adalah analisis materi genetik agen patogen dan penentuan viral load.

    Diagnosis laboratorium hepatitis C

    Diagnosis laboratorium dimulai dengan enzim immunoassay. Tugas utamanya adalah mendeteksi antibodi yang dihasilkan terhadap patogen. Efektivitasnya hampir 95%. Berkat penelitian ini, dimungkinkan untuk mengidentifikasi pembawa virus pada tahap praklinis dan mengirimkannya untuk pemeriksaan lebih lanjut.

    Analisis kualitatif ELISA menunjukkan ada tidaknya imunoglobulin dalam darah pasien. Hasilnya mungkin "positif" atau "negatif." Setelah menerima jawaban pertama, orang tersebut dikirim untuk pemeriksaan berikutnya - PCR. Harganya tergantung pada kualitas reagen dan laboratorium. Biaya polymerase chain reaction bisa mencapai 4 ribu rubel.

    Fitur PCR

    Menggunakan reaksi berantai polimerase, bahkan sejumlah kecil bahan biologis memungkinkan kami memperkirakan viral load dalam darah, yaitu menghitung konsentrasi patogen dalam satu mililiter cairan.

    Dengan munculnya PCR, diagnosis hepatitis menjadi lebih mudah. Analisis memungkinkan untuk mengidentifikasi RNA HCV, untuk menetapkan tahap proses infeksi dan daya infeksi pembawa virus.

    Ada beberapa jenis diagnosis genetik:

    1. Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C - mengkonfirmasi ada tidaknya HCV dalam darah subjek:
    2. kuantitatif, di mana Anda dapat menghitung konsentrasi virus dan menetapkan stadium penyakit. Hasilnya diberikan dalam IU / ml atau salinan / ml (tergantung pada laboratorium);
    3. genotyping - diperlukan untuk menentukan genotipe HCV. Ini diperlukan untuk pemilihan obat yang tepat yang akan paling efektif dalam kasus ini. Analisis secara tidak langsung menunjukkan keparahan proses patologis di hati. Jadi, dengan genotip ketiga dari patogen, steatosis paling sering diamati, yang dasarnya adalah akumulasi lemak dalam hepatosit (sel-selnya). Selain itu, jenis virus mempengaruhi hasil dan durasi kursus terapeutik.

    Analisis kualitatif PCR untuk hepatitis C

    Pertama-tama, bahan biologis diperiksa di laboratorium untuk keberadaan RNA HCV. Penting untuk diingat bahwa analisis kualitatif hepatitis C memiliki tingkat kepekaan tertentu, dan karena itu mungkin tidak selalu memberikan jawaban yang benar. Dalam hal ini, dianjurkan untuk melakukan kembali diagnosa laboratorium menggunakan reagen lain.

    Untuk mendapatkan hasil yang dapat diandalkan, sistem uji dengan sensitivitas setidaknya 50 IU / ml harus digunakan.

    Hasil diagnosis dapat berupa "positif" atau "negatif". Jika patogen tidak ditemukan di dalam darah, penelitian selesai. Jika agen patogen terdeteksi dalam sampel, maka viral load dikuantifikasi.

    Tanggapan negatif palsu diperoleh ketika proses teknologi dilanggar, misalnya, komponen aktif yang menekan konstruksi salinan patogen memasuki medium. Dengan demikian, tidak mungkin untuk menampilkan gambaran darah yang sebenarnya, itulah sebabnya infeksi seseorang tidak didiagnosis.

    Hasil positif palsu dapat diperoleh jika tabung untuk pengumpulan bahan biologis, serta lingkungan untuk penelitian terkontaminasi. Selain itu, tanggapan analisis semacam itu dimungkinkan dengan infeksi campuran, ketika hati dipengaruhi oleh beberapa virus, misalnya, hepatitis C dan D.

    Indikasi untuk penelitian kualitatif

    Dokter dapat meresepkan pasien penelitian kualitatif pada identifikasi RNA virus hepatitis C:

    • setelah menerima respons immunoassay enzim positif atau meragukan;
    • untuk verifikasi diagnosis;
    • menentukan viral load;
    • pengaturan stadium penyakit;
    • diagnosis infeksi campuran. Hepatitis C sering menginfeksi hati secara bersamaan dengan virus "D";
    • penentuan taktik terapeutik dengan mempertimbangkan genotipe agen penyebab;
    • menilai dinamika perubahan selama perawatan dengan obat antiviral.

    Keuntungan dari reaksi berantai polymerase meliputi:

    1. sensitivitas tinggi dari teknik, yang memungkinkan untuk menetapkan fakta infeksi pada tahap praklinis;
    2. identifikasi bahan genetik patogen, dan bukan antibodi;
    3. kemungkinan membentuk subtipe agen patogen;
    4. kecepatan tinggi diagnostik, karena tidak memerlukan penyemaian materi pada medium nutrisi, dan itu sudah cukup untuk menggunakan sistem uji spesifik. Seseorang menerima hasil setelah 5 jam;
    5. keserbagunaan. Analisis memungkinkan untuk mengidentifikasi materi genetik apa pun (RNA, DNA). Karena itu, dokter dapat memastikan hepatitis C dan jenis penyakit lainnya (B);
    6. kemampuan untuk mendeteksi infeksi laten.

    Penelitian kuantitatif

    Dalam studi darah menggunakan reaksi rantai polimerase dapat menghitung jumlah patogen dalam volume tetap bahan biologis. Indikator disajikan dalam IU / ml. Melalui analisis, adalah mungkin untuk menentukan tingkat penularan pasien, menentukan tahap proses infeksi, dan juga mengevaluasi efektivitas terapi obat.

    Atas dasar PCR, spesialis memutuskan dosis obat mana yang dapat memblokir reproduksi patogen. Selain itu, durasi pengobatan antiviral dan prognosis untuk kehidupan ditentukan. Penting untuk diingat bahwa sistem uji memiliki sensitivitas yang tinggi, sehingga metode ini memungkinkan untuk mengkonfirmasi infeksi seseorang pada tahap praklinis.

    Genotyping

    Mengingat kemampuan patogen untuk bermutasi, genotipnya diperlukan untuk menentukan taktik pengobatan dan pilihan obat antiviral. Misalnya, pengobatan hepatitis B HCV 1 berlangsung selama 48 minggu, dengan kecenderungan positif yang diamati hanya pada 60% kasus. Genotipe 2 dan 3 memiliki prognosis yang lebih menguntungkan. Obat antiviral diresepkan selama 8 bulan, dan efektivitasnya mencapai 85%.

    Menurut statistik, dalam banyak kasus, HCV 1, 2 dan 3 terdaftar di Federasi Rusia.

    Ketika mengartikan tes laboratorium, jawaban ini dapat diindikasikan - "tidak diketik". Ini berarti bahwa virus sedang beredar di sistem sirkulasi pasien dan tidak dapat dikenali oleh sistem tes. Hasil analisis dalam kasus ini menunjukkan bahwa patogen tidak khas untuk wilayah geografis tertentu.

    Bagaimana cara mendapatkan hasil yang dapat diandalkan?

    Agar penelitian kualitatif PCR untuk mendeteksi RNA agen penyebab hepatitis C menunjukkan hasil yang benar, perlu untuk mengamati persyaratan untuk mempersiapkan diagnosa laboratorium:

    1. pengambilan sampel darah dilakukan dengan perut kosong, dan kesenjangan "lapar" tidak boleh lebih pendek dari 8 jam;
    2. dua hari sebelum penelitian, dianjurkan untuk berhenti minum minuman beralkohol dan meninggalkan hidangan pedas, berlemak dan diasapi;
    3. membatalkan pengenalan obat-obatan yang mengurangi pembekuan darah, misalnya, heparin. Jika obat-obatan ini diresepkan untuk alasan kesehatan, Anda harus memberi tahu dokter. Selain itu, spesialis harus menyadari penerimaan obat lain yang dapat mempengaruhi hasil penelitian laboratorium;
    4. Pada malam pengumpulan bahan biologis, prosedur fisioterapi tidak boleh dilakukan dan tidak boleh mengalami aktivitas fisik yang berat.

    Hasil analisis dapat dipengaruhi tidak hanya oleh orang yang mendonorkan darah, tetapi juga oleh faktor lain, yaitu:

    • pengambilan sampel darah berkualitas buruk;
    • ketidakpatuhan terhadap rekomendasi tentang transportasi bahan biologis;
    • pelatihan pekerja laboratorium yang tidak mencukupi;
    • tidak sesuai dengan teknik penelitian;
    • pengenalan antikoagulan (heparin) pada malam pengambilan sampel darah. Kelompok obat ini mengurangi pembekuan, sehingga memperlambat kerja reagen.

    Di laboratorium yang berbeda, respons diagnostik mungkin sedikit berbeda, tetapi kesalahan ini tidak mempengaruhi hasil akhir penelitian.

    Perhatian khusus diberikan pada jenis sistem uji yang digunakan di laboratorium. Seringkali preferensi diberikan kepada reagen dengan sensitivitas tinggi. Ini penting untuk pasien dengan viral load rendah, karena sulit dideteksi.

    Seberapa sering tes laboratorium dilakukan?

    Reaksi rantai polimerase primer dilakukan pada orang yang telah terdeteksi oleh antibodi immunoassay terhadap patogen hepatitis. Dalam hal ini, ditugaskan untuk mengkonfirmasi fakta infeksi seseorang dan menetapkan stadium penyakit. Selain itu, analisis memungkinkan untuk menentukan subtipe virus, yang sangat penting untuk pilihan obat.

    Periode berikutnya untuk pengujian laboratorium wajib adalah 3 bulan sejak dimulainya terapi antiviral. Diagnostik memungkinkan untuk mengevaluasi efektivitas obat, menyesuaikan dosis atau menggantinya.

    Selain tes dasar, PCR dapat dilakukan tambahan pada 4 dan 24 minggu dari awal perawatan. Prognosis positif dari penyakit ini dikonfirmasi oleh penurunan viral load setelah tiga bulan terapi. Misalnya, harus turun dari 1 juta IU / ml hingga beberapa ratus ribu.

    Jika konsentrasi agen patogen dalam darah tetap pada tingkat yang sama atau meningkat sedikit, ini menunjukkan ketidakefektifan obat antiviral dan membutuhkan penggantian. Dengan menggunakan PCR pada akhir perawatan, adalah mungkin untuk mengkonfirmasi pemulihan pasien.

    Untuk benar menginterpretasikan hasil diagnosa laboratorium, konsultasi ahli hepatologi atau spesialis penyakit menular diperlukan. Mengingat tingginya frekuensi tanggapan palsu dalam ELISA, analisis ini digunakan secara eksklusif untuk penyaringan awal. Untuk pemeriksaan yang lebih menyeluruh dari pasien digunakan reaksi berantai polymerase.

    Apakah mungkin untuk menyembuhkan hepatitis C tanpa efek samping?

    Saat ini, obat modern dari generasi baru Sofosbuvir dan Daclatasvir kemungkinan untuk menyembuhkan hepatitis C sebesar 97-100%. Anda bisa mendapatkan obat-obatan terbaru di Rusia dari perwakilan resmi raksasa farmasi India Zydus Heptiza. Obat yang dipesan akan dikirim melalui kurir dalam waktu 4 hari, pembayaran setelah diterima. Dapatkan konsultasi gratis tentang penggunaan obat-obatan modern, serta pelajari cara mengakuisisi, Anda dapat menemukannya di situs resmi pemasok Zydus di Rusia.


    Artikel Terkait Hepatitis